二抗選擇具體過程

1.     針對一抗的宿主來源選擇：二抗指向一抗的物種

2.針對一抗的類別亞型的選擇： 二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體。

3.二抗的種屬來源：除雙標實驗以外，一般來說，不同的種屬來源與二抗的質(zhì)量沒有必然的聯(lián)系，來源于山羊的二抗與來源于驢的二抗在一般的實驗里沒有太多的差別。

4.二抗的耦聯(lián)標記：針對不同的實驗方法選擇不同的標記，一般來講，耦聯(lián)到二抗上的探針主要有酶(辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP)，熒光基團(FITC、 Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight等)、生物素、金顆粒。一般做WB、 ELISA、 IHC等實驗都是推薦HRP標記的二抗，做IF FC等都是FITC標記的抗體。

5.預(yù)吸附二抗的選擇：對于于富含免疫球蛋白的組織和細胞，通常推薦使用預(yù)吸附血清的二抗于蛋白質(zhì)印跡應(yīng)用。預(yù)吸附的二抗與內(nèi)源免疫球蛋白發(fā)生相互作用的可能性較低，因此可降低非特異性背景

6.特殊要求： F(ab’)2片段形式的二抗可避免與Protein A /G或與Fc受體的結(jié)合，其分子本身比較小，更容易滲透入細胞組織結(jié)構(gòu)內(nèi)而靈敏度更高 。Fab片段形式的二抗是只含有一個結(jié)合位點，可用來封閉內(nèi)源性的免疫球蛋白；一般無要求的都是指抗IgG H&L，這類抗體和IgG分子的重鏈和輕鏈都可以反應(yīng)，也可以和其他的免疫球蛋白家族（IgM，IgA，IgD,IgE）和亞家族反應(yīng)，因為所有的免疫球蛋白都有相同的輕鏈.