免疫組化技巧

1、做前防護(hù)：二甲苯有毒易揮發(fā)，二甲苯可以誘導(dǎo)白血病。必須在通風(fēng)廚中脫蠟和透明。

2、脫蠟前將石蠟切片放入 60 度烘箱中烘烤 2 個小時，有助于脫蠟，并可以防脫片。

3、提高溫度有助于二甲苯脫蠟，冬天時，可將二甲苯先放入 37°孵箱中保溫，再進(jìn)行脫蠟，提高脫蠟效果。

4、脫蠟過程，最后一步二甲苯應(yīng)盡量保持新鮮二甲苯，同時將上次的二甲苯依次往前一個二甲苯中更換，因為最前的二甲苯是石蠟殘留最多，越往后的二甲苯中石蠟越少。

5、水化過程，最后的一個乙醇也應(yīng)該勤換，同理，最后一個乙醇中的二甲苯最少。6、消除內(nèi)源性過氧化物酶建議用 3% H2O2（甲醇 90ml+H2O2 10ml）（PS：H2O2 原濃度是 30%的，變成 3%應(yīng) 10 倍稀釋）, 甲醇具有固定作用，有助于保護(hù)組織。

7、抗原修復(fù)，0.01M 檸檬酸鈉緩沖液（PH 6.0），建議使用高壓鍋來抗原修復(fù)，高壓鍋溫度較為穩(wěn)定，微波爐抗原修復(fù)火候控制不穩(wěn)定，導(dǎo)致修復(fù)液經(jīng)常沸騰時易引起脫片。

8、封閉前，建議使用免疫組化筆將組織部分畫圈，防止抗體流出片子。很好用的，不過500個大洋哦。

9、DAB 顯色程度把握，在目的組織處，顯現(xiàn)出黃色或者棕色顆粒狀時，而組織邊緣尚還未顯色時，終止顯色。簡而言之，在邊緣效應(yīng)出現(xiàn)前，而目的蛋白顯色出來時終止最佳。

10、封片前，脫水步驟即為水化的反方向操作，注意事項同理。

11、免疫組化拍照時，高倍鏡下視野模糊，無論如何調(diào)節(jié)顯微鏡焦距都無法清晰時，考慮脫水沒有脫干凈及切片未二甲苯透明。

12、免疫組化結(jié)果好壞判斷：目的蛋白成黃色棕色細(xì)沙或細(xì)顆粒狀，蛋白顯色定位正確，核還是漿。背景無色，細(xì)胞核藍(lán)色。