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ELISA的類(lèi)型有哪些
根據(jù)試劑的來(lái)源和樣本的情況以及檢測(cè)的具體條件,可設(shè)計(jì)出各種不同類(lèi)型的檢測(cè)方法,按照原理及操作,市面的方法有:
1.間接法ELISA
是檢測(cè)抗體的方法,原理為利用酶標(biāo)記的二抗以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體,顯色測(cè)定。優(yōu)勢(shì)在于待測(cè)一抗無(wú)需標(biāo)記快速便捷。直接法ELISA與間接法ELISA相似,區(qū)別在于一抗酶標(biāo),檢測(cè)孵育也以抗原為主,但直接法ELISA的靈敏度有限,需權(quán)衡使用。
2.夾心法ELISA
又分為雙抗原夾心法和雙抗體夾心法ELISA,原理相似,用于檢測(cè)抗體或抗原含量。以雙抗體夾心法為例,捕獲抗體包被在固相載體上,加入抗原或待測(cè)樣本結(jié)合,后加入的檢測(cè)抗體結(jié)合在抗原上,形成三明治夾心形式。雙抗夾心法是市面最常見(jiàn)與方便分析的方法。
3.競(jìng)爭(zhēng)法ELISA
小分子抗原與半抗原的檢測(cè)方法常用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA,待檢樣本中抗原越多,被結(jié)合的酶標(biāo)抗原的量會(huì)減少,彼此形成競(jìng)爭(zhēng)負(fù)相關(guān)體系,顯色物質(zhì)也就越少,根據(jù)顯色物質(zhì)的比例可擬合得到待測(cè)抗原含量。
4.其他方法
a.免疫抑制法測(cè)ELISA:固相包被抗原,被檢樣本對(duì)底物顯色的抑制程度與樣本中所含抗原的量成正比,二者之差為待測(cè)抗原含量,原理類(lèi)似與競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。
b.阻斷ELISA:目的檢測(cè)特異性抗體,也稱(chēng)為競(jìng)爭(zhēng)ELISA,原理為固相包被抗原,待測(cè)樣本與一抗酶標(biāo)競(jìng)爭(zhēng)孵育,待檢樣本中抗體越多,顯色越淺,反則反之。非洲豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒中涉及該法。
c.此外有用于檢測(cè)IgM抗體的抗體捕捉ELISA,有固相載體改變的Dot-ELISA(硝酸纖維素膜)和C-ELISA(滌綸布),還有技術(shù)分類(lèi)的TRFIA和多因子檢測(cè)等。
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