ELISA實(shí)驗(yàn)的加樣原理是什么？

        ELISA是免疫學(xué)中常用檢測辦法，在ELISA試驗(yàn)進(jìn)程中加樣也是極為重要的步驟之一。今日，酶聯(lián)生物將為廣大科研朋友解說ELISA試劑盒試驗(yàn)加樣的原理，以供咱們參閱：
        正確的加樣辦法應(yīng)為45度，吸頭貼著孔壁參加，應(yīng)留意視點(diǎn)太小，會(huì)使液體殘留在孔壁上，導(dǎo)致加樣不精確；吸頭應(yīng)當(dāng)貼著管壁和液面的交界處！
要留意防止呈現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有相似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育進(jìn)程中吸附于固相，然后與后邊參加的HRP底物反響顯色。

        血清標(biāo)本如是以無菌操作別離，則可以在2～8 ℃下保存一周，如為有菌操作，則主張冰凍保存。樣本的長時(shí)間保存，應(yīng)在-70 ℃以下。樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的成長，其所排泄的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果；二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定辦法發(fā)生非特異性干擾。

        標(biāo)本在保存中如呈現(xiàn)細(xì)菌污染所形成的的混濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉積后取上清檢測。冰凍保存的血清標(biāo)本須留意防止因停電等形成的重復(fù)凍融。標(biāo)本的重復(fù)凍融所發(fā)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)生損壞效果，然后引起假陰性成果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)留意，不要進(jìn)行劇烈振動(dòng)，重復(fù)倒置混勻即可。