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ELISA實驗的這三條基本原理,你都清楚嗎
ELISA是免疫確診中的一項新技術(shù),現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的盛行癥、寄生蟲病及非盛行癥等方面的免疫確診。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據(jù)現(xiàn)已運用的效果,以為ELISA試劑盒具有靈敏、特異、簡略、快速、安穩(wěn)及易于自動化操作等特征。不只適用于實驗標(biāo)本的檢測,而且因為一天之內(nèi)可以檢測幾百乃至上千份標(biāo)本,因而,也適合于血清盛行病學(xué)查詢。本法不只可以用來測定抗體,而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種前期確診的杰出方法。
1、抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分彼此吸附,并堅持其免疫學(xué)活性;
2、抗原或抗體可通過共價鍵與酶銜接構(gòu)成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能堅持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
3、酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)參與底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,因而,可以按底物顯色的程度閃現(xiàn)實驗效果。
因為ELISA試劑盒一方面是建立在抗原與抗體免疫學(xué)反應(yīng)的基礎(chǔ)上,因而,具有特異性。而另一方面又因為酶符號抗原或抗體是酶分子與抗原或抗體分子的結(jié)合物,它可以催化底物分子發(fā)作反應(yīng),發(fā)生擴(kuò)展效果,正因為此種擴(kuò)展效果而使本法具有很高的靈敏性。因而,ELISA試劑盒是一種既靈敏又特異的方法。
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