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為何牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)實驗中如此受寵呢?
1. 提供結(jié)合蛋白:作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì),在細(xì)胞代謝過程中起重要作用。
2. 提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷。
3. 提供基本營養(yǎng)物質(zhì):氨基酸、維生等是細(xì)胞生長必須的物質(zhì)。
4. 提供激素和各種生長因子。
5. 對培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。
針對第五個原因,我們來重點談?wù)?。有一些?xì)胞,如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的,現(xiàn)在則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。
我司技術(shù)員分析,這是因為胰蛋白酶已經(jīng)被廣泛用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。血清蛋白形成了的粘度可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷,特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時,粘度起到重要作用。還含有一些微量元素和離子,他們在代謝解毒中起重要作用。
特別說明到了有多位老師提出問題:人血清一定要加熱滅活嗎?不然會怎樣?其實對于它的加熱滅活是應(yīng)該根據(jù)情況而定的。
很多朋友在使用實驗者認(rèn)為一定需要加熱滅活,其實這個認(rèn)知是不正確的,是否需要滅活是要根據(jù)情況而定。人們通常通過在56℃加熱30分鐘的辦法,來滅活其中的補(bǔ)體,以及其中可能的微生物(比如支原體)的污染。
加熱滅活帶來的問題是,其中的氨基酸、維生素和生長因子等也會不同程度的被破壞。
但是它的補(bǔ)體含量很低,即使在未稀釋的胎牛血清中,也觀察不到溶血現(xiàn)象。另外37℃的加熱能夠有效滅活補(bǔ)體。所以對它而言,并不需要通過專門的熱滅活來滅活其中的補(bǔ)體。
早期的人血清制備中的濾膜的孔徑大于0.22um,不能有效的去除支原體的污染。熱滅活可以去除支原體的污染。但是現(xiàn)在制備中的終端濾膜的孔徑為0.1um甚至小到0.04um,所以一般沒有支原體的污染。
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