土壤幾丁質(zhì)酶試劑盒說(shuō)明書(shū)

注意：正式測(cè)定之前選擇2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

貨號(hào)：DM-W-B917

規(guī)格：100 管/48 樣

產(chǎn)品內(nèi)容：

緩沖液：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存，使用前搖勻。試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

微量法

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1 瓶。5mg N-乙酰氨基葡萄糖，4℃保存。臨用前加入 2.27mL 蒸餾水配成10μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

產(chǎn)品說(shuō)明：

幾丁質(zhì)主要存在于蝦、蟹、昆蟲(chóng)等甲殼類(lèi)動(dòng)物的外殼與軟體動(dòng)物的器官(例如烏賊的軟骨)，以及真菌類(lèi)的細(xì)胞壁中，而幾丁質(zhì)酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質(zhì)水解，具有抵御真菌侵染的作用，成為抗真菌病害的研究熱點(diǎn)。

幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖，進(jìn)一步與 3,5-二硝基水楊酸產(chǎn)生棕紅色化合物， 在540nm 處有特征吸收峰，吸收值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。

需自備的儀器和用品：

天平、水浴鍋、離心機(jī)、震蕩儀、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板，甲苯、蒸餾水。

操作步驟：

1、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min。波長(zhǎng)調(diào)至 540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、將標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋為 5、4、3、2、1μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

3、在 EP 管中分別加入：

三、計(jì)算公式

標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：以濃度（y） 為縱坐標(biāo)，ΔA 標(biāo)準(zhǔn)（x）為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

以ΔA 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為 x 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b。將ΔA 測(cè)定帶入標(biāo)準(zhǔn)方程中，得到 x（μmol/mL）

酶活性定義：37℃條件下，每克土壤每天分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1μmol N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活性單位。

幾丁質(zhì)酶活力（U /g 土樣）＝ y×V 反總÷W÷T =3.12×y÷W

T：反應(yīng)時(shí)間，1/24d； V 反總：反應(yīng)體系總體積：0.13mL；W：樣品質(zhì)量，0.02g。