人γ氨基丁酸(GABA) ELISA 試劑盒

試劑盒組成

操作步驟

1. 準備工作

（1）將試劑盒從冰箱中取出，放置至室溫；

（2）準備所需的試劑和樣品；

（3）將酶標板用洗滌液清洗干凈。

2. 包被抗原

（1）將抗原按照說明書要求稀釋后，加入酶標板孔中，每孔100μL；

（2）將酶標板輕輕搖晃，使抗原充分覆蓋酶標板孔底部；

（3）將酶標板放入濕盒中，4℃孵育過夜。

3. 洗滌和干燥

（1）取出酶標板，用洗滌液清洗5次，每次清洗時間為1分鐘；

（2）用吸水紙輕輕吸干酶標板表面的水分。

4. 加樣和孵育

（1）在每個酶標板孔中加入100μL待測血清；

（2）將酶標板輕輕搖晃，使血清充分覆蓋抗原；

（3）將酶標板放入濕盒中，37℃孵育1小時。

5. 洗滌和干燥

（1）取出酶標板，用洗滌液清洗5次，每次清洗時間為1分鐘；

（2）用吸水紙輕輕吸干酶標板表面的水分。

6. 加酶標抗體

（1）在每個酶標板孔中加入100μL酶標抗體；

（2）將酶標板輕輕搖晃，使酶標抗體充分覆蓋抗原；

（3）將酶標板放入濕盒中，37℃孵育1小時。

7. 洗滌和干燥

（1）取出酶標板，用洗滌液清洗5次，每次清洗時間為1分鐘；

（2）用吸水紙輕輕吸干酶標板表面的水分。

8. 加底物顯色

（1）在每個酶標板孔中加入100μL底物溶液；

（2）將酶標板輕輕搖晃，使底物溶液充分覆蓋抗原；

（3）將酶標板放入濕盒中，37℃孵育15-30分鐘。

9. 終止反應并測量吸光度值

（1）在每個酶標板孔中加入50μL終止液；

（2）立即用酶標儀測量各孔的吸光度值。

計算

以標準物的濃度為橫坐標（對數(shù)坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

人γ氨基丁酸(GABA) ELISA 試劑盒

實驗注意事項

1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用。

2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3. 濃度為 0 的標準品可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋 5 倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本最終濃度。

4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

6. 若中英文說明書有誤，請以中文說明書為準。

7. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。

8. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

試劑盒性能：

1. 檢測范圍：1.95 nmol/L –100 nmol/L。

2. 靈敏度：檢測濃度小于0.78 nmol/L。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。

4. 重復性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

合作單位:

中國醫(yī)科大學、復旦大學、北京大學、貴陽醫(yī)學院、中國農(nóng)業(yè)大學

天津疾控中心、江南大學、山東大學、青島大學、香港大學

云南省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院