人可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL) ELISA 試劑盒

實驗原理

    ELISA運用了免疫學原理和化學反應顯色原理，需要將抗原或抗體預包被在固相載體表面，使后來形成的抗原-抗體-酶 (熒光基團) -底物復合物黏附在載體上，通過檢測OD值或發(fā)光值，來檢測靶蛋白的含量。

實驗所需自備物品

1. 酶標儀（450nm）

2. 加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

試劑盒組成

操作步驟

 人可溶性核因子κB受體活化因子配基試劑盒

1. 準備工作：將試劑盒從冰箱中取出，室溫放置30分鐘，使試劑盒恢復至室溫。同時準備好實驗所需的材料和器具。
2. 加樣：在酶標板的弟1個孔中加入標準品50μL，然后在后續(xù)的孔中依次加入待測樣本50μL。
3. 溫育：將酶標板密封，在37℃下溫育30分鐘。
4. 洗滌：用洗滌液清洗酶標板，共洗滌5次。每次洗滌后，用吸水紙輕輕吸干孔內(nèi)液體。
5. 加酶：在每個孔中加入酶標物100μL。
6. 溫育：再次將酶標板密封，在37℃下溫育30分鐘。
7. 洗滌：用洗滌液清洗酶標板，共洗滌5次。每次洗滌后，用吸水紙輕輕吸干孔內(nèi)液體。
8. 加底物：在每個孔中加入底物A液50μL，再加入底物B液50μL。
9. 終止反應：在每個孔中加入終止液50μL。
10. 檢測：用酶標儀在450nm波長下讀取各孔的吸光度（OD值）。

 人可溶性核因子κB受體活化因子配基試劑盒

結(jié)果分析

根據(jù)標準品和樣本的OD值，繪制標準曲線，從而計算出樣本中角蛋白1（KRT1）的濃度。具體分析方法可參考試劑盒說明書或相關文獻。

注意事項

1. 在操作過程中，應保持酶標板的干燥，避免水分進入孔內(nèi)。
2. 加樣時需確保加樣準確、無氣泡產(chǎn)生。
3. 溫育和洗滌過程中需嚴格控制時間和溫度，確保實驗結(jié)果的準確性。
4. 在使用酶標儀讀取OD值時，需確保波長設置正確，避免誤差產(chǎn)生。
5. 在整個實驗過程中，需保持操作環(huán)境的清潔和整潔，避免交叉污染。

洗板方法

1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5次。

2.自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。