人黑色素瘤凋亡抑制蛋白(BIRC7)ELISA試劑盒

原理

      試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被相關(guān)指標的抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的相關(guān)指標呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

注意事項

1. 試劑盒保存于2-8℃，切勿反復(fù)凍融或長時間保存于室溫。

2. 實驗前確保所有試劑均已恢復(fù)至室溫。

3. 加樣時注意避免產(chǎn)生氣泡。

4. 洗滌時要保證充分洗滌，避免殘留物影響實驗結(jié)果。

5. 底物溶液應(yīng)避光保存，避免長時間暴露于空氣中。

6. 酶標儀應(yīng)使用450nm波長進行讀數(shù)，其他波長可能導(dǎo)致誤差。

7. 本試劑盒僅用于科研實驗和診斷參考，不適用于臨床診斷和治療。

試劑盒組成

人黑色素瘤凋亡抑制蛋白(BIRC7)ELISA試劑盒

操作步驟

1. 樣品收集與處理

（1）根據(jù)需要收集不同種類的樣品，如血清、血漿、尿液等。

（2）對于血清和血漿樣品，將采集的血液靜置一段時間后，離心分離出血清或血漿。

（3）對于尿液樣品，收集尿液后，可直接進行檢測。

2. 樣品稀釋

  根據(jù)試劑盒說明，對需要稀釋的樣品進行適當比例的稀釋。

3. 加樣

（1）按照試劑盒說明，分別將標準品、質(zhì)控品和待測樣品加入相應(yīng)的孔中。

（2）每孔加入50μL，輕輕震蕩混勻。

4. 封閉

  根據(jù)試劑盒說明，加入適量的封閉液，覆蓋板孔，并輕輕震蕩混勻。封閉液一般為含有一定濃度的非特異性結(jié)合配體的溶液，可以降低非特異性結(jié)合的影響。

5. 洗滌

（1）將板孔洗滌液加入到每個孔中，輕輕震蕩，然后倒掉洗滌液。重復(fù)洗滌3次，每次用洗滌液充分洗滌

（2）最后一次洗滌后，用紙巾輕輕吸干板孔表面的水分。

6. 酶標二抗加入及孵育

（1）根據(jù)試劑盒說明，將酶標二抗加入相應(yīng)的孔中。

（2）孵育一定時間后，將板孔中的溶液倒掉。

7. 洗滌與顯色

（1）重復(fù)步驟5的洗滌過程。

（2）加入顯色劑，孵育一定時間后，將板孔中的溶液倒掉。

8. 終止反應(yīng)與讀數(shù)

（1）加入終止液，終止酶促反應(yīng)。

（2）用酶標儀在450nm波長處讀取各孔的光密度值（OD值）。

結(jié)果分析

根據(jù)試劑盒提供的標準品濃度及對應(yīng)的OD值，利用標準品繪制的標準曲線，計算待測樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進行數(shù)據(jù)處理，通過計算得到待測樣品的濃度。

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