人Nesfatin 1蛋白(NES1) ELISA 試劑盒 

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗（ELISA）。往預先包被相關指標的抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的相關指標呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

實驗步驟

1. 準備試劑盒：將試劑盒從冰箱中取出，室溫放置30分鐘以上，使試劑盒恢復至室溫。

2. 加樣：分別向各孔中加入標準品、待測樣本和空白孔，每孔加入50μl。

3. 孵育：用封板膠紙封住反應孔，輕輕振蕩混勻，37℃孵育1小時。

4. 洗滌：甩去孔內液體，用洗滌液充分洗滌4-5次，每次30秒。

5. 加酶標二抗：每孔加入50μl酶標二抗溶液，輕輕振蕩混勻，37℃孵育30分鐘。

6. 洗滌：甩去孔內液體，用洗滌液充分洗滌4-5次，每次30秒。

7. 加底物：每孔加入50μl底物溶液，輕輕振蕩混勻，37℃孵育15-20分鐘。

8. 終止反應：每孔加入50μl終止液，輕輕振蕩混勻。

9. 讀數(shù)：用酶標儀在450nm波長處讀取各孔的光密度值

試劑盒組成

注意事項

1. 試劑盒保存于2-8℃，切勿反復凍融或長時間保存于室溫。

2. 實驗前確保所有試劑均已恢復至室溫。

3. 加樣時注意避免產生氣泡。

4. 洗滌時要保證充分洗滌，避免殘留物影響實驗結果。

5. 底物溶液應避光保存，避免長時間暴露于空氣中。

6. 酶標儀應使用450nm波長進行讀數(shù)，其他波長可能導致誤差。

7. 本試劑盒僅用于科研實驗和診斷參考，不適用于臨床診斷和治療。

人Nesfatin 1蛋白(NES1) ELISA 試劑盒

洗板方法

1.手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5次。

2.自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

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