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人腫瘤蛋白p63(TP63) ELISA 試劑盒
實(shí)驗(yàn)原理
1. 抗體或抗原的吸附:將待測(cè)抗原或抗體吸附到固相載體上,常用的載體有微孔板、玻璃纖維、聚苯乙烯等。這些載體表面具有特殊的化學(xué)基團(tuán),能夠與待測(cè)抗原或抗體特異性結(jié)合。
2. 酶標(biāo)記的抗體或抗原的結(jié)合:將酶標(biāo)記的抗體或抗原與待測(cè)抗原或抗體結(jié)合,形成酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物。酶標(biāo)記的抗體或抗原具有高度的特異性和親和力,能夠與待測(cè)抗原或抗體形成穩(wěn)定的復(fù)合物。
3. 底物顯色反應(yīng):當(dāng)酶標(biāo)記的抗原-抗體復(fù)合物與底物溶液接觸時(shí),酶能夠催化底物分解,產(chǎn)生顏色變化。通過(guò)測(cè)量顏色的變化程度,可以判斷待測(cè)抗原或抗體的濃度。
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 樣品收集與處理
(1)根據(jù)需要收集不同種類(lèi)的樣品,如血清、血漿、尿液等。
(2)對(duì)于血清和血漿樣品,將采集的血液靜置一段時(shí)間后,離心分離出血清或血漿。
(3)對(duì)于尿液樣品,收集尿液后,可直接進(jìn)行檢測(cè)。
2. 樣品稀釋
根據(jù)試劑盒說(shuō)明,對(duì)需要稀釋的樣品進(jìn)行適當(dāng)比例的稀釋。
3. 加樣
(1)按照試劑盒說(shuō)明,分別將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和待測(cè)樣品加入相應(yīng)的孔中。
(2)每孔加入50μL,輕輕震蕩混勻。
4. 封閉
根據(jù)試劑盒說(shuō)明,加入適量的封閉液,覆蓋板孔,并輕輕震蕩混勻。封閉液一般為含有一定濃度的非特異性結(jié)合配體的溶液,可以降低非特異性結(jié)合的影響。
5. 洗滌
(1)將板孔洗滌液加入到每個(gè)孔中,輕輕震蕩,然后倒掉洗滌液。重復(fù)洗滌3次,每次用洗滌液充分洗滌
(2)最后一次洗滌后,用紙巾輕輕吸干板孔表面的水分。
6. 酶標(biāo)二抗加入及孵育
(1)根據(jù)試劑盒說(shuō)明,將酶標(biāo)二抗加入相應(yīng)的孔中。
(2)孵育一定時(shí)間后,將板孔中的溶液倒掉。
7. 洗滌與顯色
(1)重復(fù)步驟5的洗滌過(guò)程。
(2)加入顯色劑,孵育一定時(shí)間后,將板孔中的溶液倒掉。
8. 終止反應(yīng)與讀數(shù)
(1)加入終止液,終止酶促反應(yīng)。
(2)用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處讀取各孔的光密度值(OD值)。
試劑盒組成
名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標(biāo)板 | 12孔×8條 | 12孔×4條 | 無(wú) |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 無(wú) |
樣本xi釋液 | 6mL | 3mL | 無(wú) |
檢測(cè)抗體 | 10mL | 5mL | 無(wú) |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無(wú) |
底物B | 6mL | 3mL | 無(wú) |
終止液 | 6mL | 3mL | 無(wú) |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無(wú) |
說(shuō)明書(shū) | 1份 | 1份 | 無(wú) |
自封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) | 無(wú) |
人腫瘤蛋白p63(TP63) ELISA 試劑盒
注意事項(xiàng)
1. 試劑盒應(yīng)存放在干燥、陰涼處,避免陽(yáng)光直射和高溫。
2. 試劑盒中的試劑只能一次性使用,不能重復(fù)使用。
3. 在使用試劑盒過(guò)程中應(yīng)保持清潔衛(wèi)生,防止交叉污染。
4. 對(duì)于異常結(jié)果,應(yīng)進(jìn)行復(fù)檢和確認(rèn),以保障檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
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