猴骨橋素(OPN)ELISA試劑盒 

檢測前準備工作:

1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶，屬于正?，F(xiàn)象，可用40℃水浴微加熱使結晶溶解后再配制洗滌液（加熱溫度不要超過50℃，使用時洗滌液應為室溫）。當日使用。

3. 標準品: 于10000×g離心1分鐘，加入標準品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標準品中，旋緊管蓋，靜置10分鐘，上下顛倒數(shù)次，待其充分溶解后，用移液器將其輕輕混勻（濃度為8000pg/mL）。然后根據(jù)需要進行倍比稀釋（注：不要直接在反應孔中進行倍比稀釋）。建議配制成以下濃度：按照稀釋方法圖例 標準品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標準品：取0.5mL10ng/mL的上述標準品加入含有0.5mL標準品&樣品稀釋液的EP管中，混勻即可，其余濃度依此類推。 

4. 生物su化抗體工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應多配制100-200μL。使用前15分鐘，以生物su化抗體稀釋液稀釋濃縮生物su化抗體(1:100)成工作濃度。當日使用。

5. 酶結合物工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應多配制100-200μL。使用前15分鐘，以酶結合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結合物(1:100)成工作濃度。

當日使用。

實驗原理

酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種常用的免疫學檢測技術，其基本原理是利用抗原與抗體之間的特異性結合反應，通過酶促反應放大信號，檢測微量的蛋白質、細胞因子等生物活性物質。ELISA實驗中所需的試劑和耗材需滿足一定的質量要求，以保證實驗結果的準確性和可靠性。

試劑盒特點

1. 特異性高：由于是抗原抗體的特異性結合，因此試驗的特異性很高，能夠排除其他物質的干擾。

2. 靈敏度高：由于酶的放大作用，使得試驗的靈敏度大大提高，能夠檢測出微量的抗原或抗體。

3. 操作簡便：ELISA試驗操作相對簡單，容易掌握，適合于大規(guī)模樣本檢測。

4. 適用范圍廣：可以用于檢測各種抗原、抗體和激素等生物分子。

猴骨橋素(OPN)ELISA試劑盒 

實驗步驟

1. 抗原包被：將抗原溶液加入到酶標板孔中，包被抗原，使其在孔底形成一層薄膜。

2. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的抗原和其他雜質。

3. 阻斷：加入阻斷液，封閉酶標板孔中的非特異性結合位點，以減少非特異性結合。

4. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的阻斷液和其他雜質。

5. 加樣：加入待測樣本，使其與抗原發(fā)生特異性結合。

6. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的樣本和其他雜質。

7. 加酶標抗體：加入酶標記的抗體，使其與特異性結合的樣本中的待測物質發(fā)生反應。

8. 清洗：清洗酶標板，去除未結合的酶標抗體和其他雜質。

9. 顯色反應：加入底物溶液，發(fā)生酶催化反應，產(chǎn)生有色產(chǎn)物。

10. 終止反應：加入終止液，停止酶催化反應。

11. 檢測：用酶標儀測定各孔的光密度值，記錄數(shù)據(jù)。

結果分析

根據(jù)試劑盒提供的標準品濃度及對應的OD值，利用標準品繪制的標準曲線，計算待測樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進行數(shù)據(jù)處理，通過計算得到待測樣品的濃度。

注意事項

在進行ELISA檢測時，需要注意以下幾點：

1. 保證試劑盒的質量：選擇質量可靠、經(jīng)過認證的試劑盒，避免使用過期或質量不穩(wěn)定的試劑。

2. 標準化操作：按照試劑盒說明書進行標準化操作，避免操作過程中的人為誤差。

3. 避免交叉污染：在實驗過程中，要特別注意防止樣品和試劑之間的交叉污染，以免影響檢測結果的準確性。

4. 溫度控制：ELISA檢測需要在恒溫條件下進行，因此要確保實驗過程中溫度的穩(wěn)定和準確性。

5. 空白吸光度值：在實驗過程中，要特別注意空白吸光度值的穩(wěn)定性，避免其對檢測結果的影響。

6. 實驗數(shù)據(jù)的處理：對實驗數(shù)據(jù)進行正確的處理和分析，包括對異常值的處理、數(shù)據(jù)轉換等，以確保結果的準確性和可靠性。

7. 質量控制：在實驗過程中，應進行必要的質量控制，如定期進行室內(nèi)質控和室間質評等，以確保實驗室檢測結果的準確性。

科研產(chǎn)品合作單位：

吉林大學

浙江大學

農(nóng)業(yè)大學

華東理工大學生工學院

福建師范大學

浙江工業(yè)大學

北京化工大學

南通大學

同濟大學

華南理工大學

浙江工業(yè)大學

廣西大學

東華農(nóng)業(yè)大學

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