猴鈣視網(wǎng)膜蛋白(CR)ELISA試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種常用的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，其基本原理是利用抗原與抗體之間的特異性結(jié)合反應(yīng)，通過酶促反應(yīng)放大信號(hào)，檢測(cè)微量的蛋白質(zhì)、細(xì)胞因子等生物活性物質(zhì)。ELISA實(shí)驗(yàn)中所需的試劑和耗材需滿足一定的質(zhì)量要求，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

試劑盒性能

 檢測(cè)范圍：5 pg/mL – 160 pg/mL。

 靈敏度：檢測(cè)濃度小于1.0 pg/mL。

 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

試劑盒組成

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 抗原包被：將抗原溶液加入到酶標(biāo)板孔中，包被抗原，使其在孔底形成一層薄膜。

2. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的抗原和其他雜質(zhì)。

3. 阻斷：加入阻斷液，封閉酶標(biāo)板孔中的非特異性結(jié)合位點(diǎn)，以減少非特異性結(jié)合。

4. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的阻斷液和其他雜質(zhì)。

5. 加樣：加入待測(cè)樣本，使其與抗原發(fā)生特異性結(jié)合。

6. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的樣本和其他雜質(zhì)。

7. 加酶標(biāo)抗體：加入酶標(biāo)記的抗體，使其與特異性結(jié)合的樣本中的待測(cè)物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。

8. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體和其他雜質(zhì)。

9. 顯色反應(yīng)：加入底物溶液，發(fā)生酶催化反應(yīng)，產(chǎn)生有色產(chǎn)物。

10. 終止反應(yīng)：加入終止液，停止酶催化反應(yīng)。

11. 檢測(cè)：用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔的光密度值，記錄數(shù)據(jù)。

注意事項(xiàng)

在進(jìn)行ELISA檢測(cè)時(shí)，需要注意以下幾點(diǎn)：

1. 保證試劑盒的質(zhì)量：選擇質(zhì)量可靠、經(jīng)過認(rèn)證的試劑盒，避免使用過期或質(zhì)量不穩(wěn)定的試劑。

2. 標(biāo)準(zhǔn)化操作：按照試劑盒說明書進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化操作，避免操作過程中的人為誤差。

3. 避免交叉污染：在實(shí)驗(yàn)過程中，要特別注意防止樣品和試劑之間的交叉污染，以免影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4. 溫度控制：ELISA檢測(cè)需要在恒溫條件下進(jìn)行，因此要確保實(shí)驗(yàn)過程中溫度的穩(wěn)定和準(zhǔn)確性。

5. 空白吸光度值：在實(shí)驗(yàn)過程中，要特別注意空白吸光度值的穩(wěn)定性，避免其對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

6. 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理：對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行正確的處理和分析，包括對(duì)異常值的處理、數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換等，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

7. 質(zhì)量控制：在實(shí)驗(yàn)過程中，應(yīng)進(jìn)行必要的質(zhì)量控制，如定期進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評(píng)等，以確保實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的計(jì)算處理方法

1、擬和曲線：

輸入第一行： 濃度值， 如0 10 50 100 400

輸入第二行：該濃度下的調(diào)整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42

選擇這些輸入的數(shù)據(jù)，用插入里的圖表按鈕，進(jìn)入圖表向?qū)?，在“?biāo)準(zhǔn)類型"中選擇“xy散點(diǎn)圖";在“子圖表類型"中選擇“折線散點(diǎn)圖"，按“下一步";選擇“系列產(chǎn)生在行"，按“下一步";數(shù)據(jù)標(biāo)志，可以填寫：如數(shù)據(jù)y軸，OD值;數(shù)據(jù)x軸，濃度;按下一步，點(diǎn)擊完成。可得曲線圖。

單擊曲線，按右鍵，選擇“添加趨勢(shì)線"，在類型中，選擇多項(xiàng)式;在選項(xiàng)中，選擇顯示公式，選擇顯示R平方值。

得到公式和R平方值。

也可以用上面說的方法： 雙擊圖表，把它輸入到圖表的數(shù)據(jù)中，就可以擬和曲線。

科研產(chǎn)品合作單位：

吉林大學(xué)

浙江大學(xué)

農(nóng)業(yè)大學(xué)

華東理工大學(xué)生工學(xué)院

福建師范大學(xué)

浙江工業(yè)大學(xué)

北京化工大學(xué)

南通大學(xué)

同濟(jì)大學(xué)

華南理工大學(xué)

浙江工業(yè)大學(xué)

廣西大學(xué)

東華農(nóng)業(yè)大學(xué)

猴鈣視網(wǎng)膜蛋白(CR)ELISA試劑盒

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