猴GATA結(jié)合蛋白5(GATA5)酶聯(lián)免疫試劑盒 

實(shí)驗(yàn)原理

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種常用的免疫學(xué)檢測技術(shù)，其基本原理是利用抗原與抗體之間的特異性結(jié)合反應(yīng)，通過酶促反應(yīng)放大信號，檢測微量的蛋白質(zhì)、細(xì)胞因子等生物活性物質(zhì)。ELISA實(shí)驗(yàn)中所需的試劑和耗材需滿足一定的質(zhì)量要求，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

      ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達(dá)到很高的敏感度。

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 抗原包被：將抗原溶液加入到酶標(biāo)板孔中，包被抗原，使其在孔底形成一層薄膜。

2. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的抗原和其他雜質(zhì)。

3. 阻斷：加入阻斷液，封閉酶標(biāo)板孔中的非特異性結(jié)合位點(diǎn)，以減少非特異性結(jié)合。

4. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的阻斷液和其他雜質(zhì)。

5. 加樣：加入待測樣本，使其與抗原發(fā)生特異性結(jié)合。

6. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的樣本和其他雜質(zhì)。

7. 加酶標(biāo)抗體：加入酶標(biāo)記的抗體，使其與特異性結(jié)合的樣本中的待測物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。

8. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體和其他雜質(zhì)。

9. 顯色反應(yīng)：加入底物溶液，發(fā)生酶催化反應(yīng)，產(chǎn)生有色產(chǎn)物。

10. 終止反應(yīng)：加入終止液，停止酶催化反應(yīng)。

11. 檢測：用酶標(biāo)儀測定各孔的光密度值，記錄數(shù)據(jù)。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

猴GATA結(jié)合蛋白5(GATA5)酶聯(lián)免疫試劑盒

注意事項(xiàng)

在進(jìn)行ELISA檢測時，需要注意以下幾點(diǎn)：

1. 保證試劑盒的質(zhì)量：選擇質(zhì)量可靠、經(jīng)過認(rèn)證的試劑盒，避免使用過期或質(zhì)量不穩(wěn)定的試劑。

2. 標(biāo)準(zhǔn)化操作：按照試劑盒說明書進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化操作，避免操作過程中的人為誤差。

3. 避免交叉污染：在實(shí)驗(yàn)過程中，要特別注意防止樣品和試劑之間的交叉污染，以免影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4. 溫度控制：ELISA檢測需要在恒溫條件下進(jìn)行，因此要確保實(shí)驗(yàn)過程中溫度的穩(wěn)定和準(zhǔn)確性。

5. 空白吸光度值：在實(shí)驗(yàn)過程中，要特別注意空白吸光度值的穩(wěn)定性，避免其對檢測結(jié)果的影響。

6. 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理：對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行正確的處理和分析，包括對異常值的處理、數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換等，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

7. 質(zhì)量控制：在實(shí)驗(yàn)過程中，應(yīng)進(jìn)行必要的質(zhì)量控制，如定期進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評等，以確保實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

結(jié)果分析

根據(jù)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品濃度及對應(yīng)的OD值，利用標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算待測樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，通過計(jì)算得到待測樣品的濃度。

公司簡介

 （Shanghai Duoma Biotechnology Co. , Ltd is a domestic joint venture integrating scientific research and production as one of the specialized biological companies. We specialize in providing various imported brands, R&D and production of ELISA kits, cell strains, antibodies, consumables, culture media and other products, as well as technical services such as experimental outsourcing, technical guidance, operation guidance, experimentation and research. The company has a world-class R&D team, leading technology, cutting-edge R&D platform and modern production base to produce various scientific research products. We are sincerely grateful to scientists at home and abroad, scientific researchers and scholars at home and abroad for their strong support and understanding. In the future work, we will give full play to our advantages, dare to pioneer, independently innovate, dare to be pioneering and persevere, keep forging ahead on the road of life science, strive hard, aim at the frontier of international life science, and continuously innovate and develop new products. Provide better and more humanized services for scientific research.）

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