猴正輔因子4(PC4)酶聯(lián)免疫試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測(cè)方法。其基本原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合，通過酶對(duì)底物反應(yīng)的顯色反應(yīng)，對(duì)樣本中的待測(cè)物質(zhì)進(jìn)行定量或定性分析。ELISA方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、適用范圍廣等特點(diǎn)，因此在生物醫(yī)學(xué)研究、臨床診斷和食品安全檢測(cè)等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。

ELISA試劑盒用法

1.包被：用PH9.6的CBS包被液稀釋包被抗原至5μg/ml，酶標(biāo)板中每孔加入50μl，室溫、4℃或37℃過夜包被。

2.洗滌：棄包被液（用力拍干，再用無塵紙吸干），用PH7.2-7.4的1×PBST洗滌液洗板3次（每孔均要加滿），每次3min~5min。

3.封閉：每孔加封閉液（1%BSA）250μl，37℃封閉2h。

4.洗滌：用1×PBST洗滌液洗板3次，每次3min~5min。

5.加樣：加入已經(jīng)稀釋好的樣品，37℃反應(yīng)1h。一般血清樣本加入50-100μl，充分混勻。

6.洗滌：用洗滌液洗板3次，每次3min~5min。

7.加入酶標(biāo)試劑：每孔加入100μl酶標(biāo)溶液，37℃，1h。

8.洗滌：用洗滌液洗板3次，每次3min~5min。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A液50μl，再加入顯色劑B液50μl，37℃避光10-15min。

10.終止及測(cè)定：加入50μl終止液，終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值。

猴正輔因子4(PC4)酶聯(lián)免疫試劑盒 

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 抗原包被：將抗原溶液加入到酶標(biāo)板孔中，包被抗原，使其在孔底形成一層薄膜。

2. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的抗原和其他雜質(zhì)。

3. 阻斷：加入阻斷液，封閉酶標(biāo)板孔中的非特異性結(jié)合位點(diǎn)，以減少非特異性結(jié)合。

4. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的阻斷液和其他雜質(zhì)。

5. 加樣：加入待測(cè)樣本，使其與抗原發(fā)生特異性結(jié)合。

6. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的樣本和其他雜質(zhì)。

7. 加酶標(biāo)抗體：加入酶標(biāo)記的抗體，使其與特異性結(jié)合的樣本中的待測(cè)物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。

8. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體和其他雜質(zhì)。

9. 顯色反應(yīng)：加入底物溶液，發(fā)生酶催化反應(yīng)，產(chǎn)生有色產(chǎn)物。

10. 終止反應(yīng)：加入終止液，停止酶催化反應(yīng)。

11. 檢測(cè)：用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔的光密度值，記錄數(shù)據(jù)。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1. 保證試劑盒的質(zhì)量：選擇正規(guī)廠家生產(chǎn)的試劑盒，確保試劑盒的質(zhì)量和穩(wěn)定性。

2. 嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件：實(shí)驗(yàn)過程中要嚴(yán)格控制溫度、pH值、離子強(qiáng)度等條件，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3. 避免交叉污染：實(shí)驗(yàn)過程中要避免交叉污染，確保每個(gè)步驟使用的試劑和材料都是清潔無污染的。

4. 標(biāo)準(zhǔn)化操作：實(shí)驗(yàn)操作要標(biāo)準(zhǔn)化，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，避免人為誤差對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

5. 定期校準(zhǔn)：定期對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，確保儀器的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。

6. 保存好實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：實(shí)驗(yàn)過程中要保存好實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，以便后續(xù)分析和處理。

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的計(jì)算處理方法

1、擬和曲線：

輸入第一行： 濃度值， 如0 10 50 100 400

輸入第二行：該濃度下的調(diào)整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42

選擇這些輸入的數(shù)據(jù)，用插入里的圖表按鈕，進(jìn)入圖表向?qū)?，在“?biāo)準(zhǔn)類型"中選擇“xy散點(diǎn)圖";在“子圖表類型"中選擇“折線散點(diǎn)圖"，按“下一步";選擇“系列產(chǎn)生在行"，按“下一步";數(shù)據(jù)標(biāo)志，可以填寫：如數(shù)據(jù)y軸，OD值;數(shù)據(jù)x軸，濃度;按下一步，點(diǎn)擊完成。可得曲線圖。

單擊曲線，按右鍵，選擇“添加趨勢(shì)線"，在類型中，選擇多項(xiàng)式;在選項(xiàng)中，選擇顯示公式，選擇顯示R平方值。

得到公式和R平方值。

也可以用上面說的方法： 雙擊圖表，把它輸入到圖表的數(shù)據(jù)中，就可以擬和曲線。

洗板方法

1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5次。

2.自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

植物樣本處理：

植物組織的提取，不管是根莖組織還是葉片組織還是果實(shí)組織，都應(yīng)該采用鮮重的計(jì)重方式，一般要遵循以下原則：

    1.稱取的組織重量不能低于50mg。

    2.勻漿的比例按照10%，即1g組織加9ml的勻漿液，勻漿液一般選取PBS(PH=7.2-7.4)

    3.組織在勻漿器勻漿過程中，勻漿液應(yīng)該分2次加進(jìn)去，這樣勻漿更充分。

    4.充分勻漿完成后離心取上清，離心機(jī)的轉(zhuǎn)數(shù)選取2000-3000轉(zhuǎn)每分，轉(zhuǎn)數(shù)不宜超過5000.離心時(shí)間為15-30分鐘。

新手實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

新手以及那些沒有固定協(xié)作供貨商的顧客購(gòu)買時(shí)往往有兩種疑慮，首要便是價(jià)格，其次，便是質(zhì)量，國(guó)內(nèi)試劑盒相關(guān)于進(jìn)口試劑盒來說價(jià)格自然會(huì)低許多。關(guān)于新手的視點(diǎn)來說價(jià)格低并不必定就會(huì)考慮購(gòu)買，同時(shí)還在猶疑質(zhì)量問題，由于沒有用過新品牌的試劑盒心中總是在懷疑。利用交叉實(shí)驗(yàn)即可辨別是否造假：小鼠ELISA檢測(cè)試劑盒說明書

1、取出購(gòu)買的試劑盒A的包被板兩條。

2、一條包被板加試劑盒A的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3、另一條包被板加試劑盒B的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4、后續(xù)操作按照試劑盒說明書進(jìn)行，加檢測(cè)抗體、酶復(fù)合物和底物。

我司在科研領(lǐng)域積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，正是為了幫助中國(guó)的相關(guān)單位能夠利用我司的經(jīng)驗(yàn)與技術(shù)優(yōu)勢(shì)，為中國(guó)民眾提供更安全，快捷的生命領(lǐng)域。

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