本試劑盒只供體外研究使用，不用于臨床診斷 

龜免疫球蛋白 M（IgM） 酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 

本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中龜免疫球蛋白 M（IgM）的含量。 

有效期：6 個月 

保存條件：2-8℃ 

試劑盒組成： 

備注： 

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1. （96T/48T）打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全。 

2. 標準品濃度依次為：200、100、50、25、12.5、0 μg/mL 

3. 經(jīng)過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實驗過程中直接取 50μL 樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時，可用樣本希釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。 

檢測前準備工作： 

1. 請?zhí)崆?20 分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。 

2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正?，F(xiàn)象；放置室溫，輕搖均勻，待結(jié)晶溶解后再配置洗滌液?？蓪?20ml 濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml 工作濃度的洗滌液，未用完的放回 4℃ 

3. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份 20×洗滌緩沖液加 19 份蒸餾水。

龜免疫球蛋白M（IgM）酶聯(lián)免疫試劑盒

實驗原理： 

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被龜免疫球蛋白 M（IgM）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP 標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物 TMB 顯色，TMB 在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的龜免疫球蛋白 M（IgM）呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

實驗所需自備試驗器材： 

1. 酶標儀（450nm） 

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 

3. 37℃恒溫箱 

4. 蒸餾水或去離子水 

樣本處理及要求： 

1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4℃過夜，然后 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 

2. 血漿：用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的 30 分鐘內(nèi)于 2-8℃ 1000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 

3. 組織勻漿：用預(yù)冷的 PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組只剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的 PBS（一般按1:9 的重量體積比，比如 1g 的組織樣品對應(yīng) 9mL 的 PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS 中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于 5000×g 離心 5~10分鐘，取上清檢測。

4. 細胞培養(yǎng)物上清：請 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 

5. 其它生物標本：1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測。 

6. 樣品外觀：樣品應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。 

7. 樣品保存：樣品收集后若在 1 周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃（1 個月內(nèi)檢測），或-80℃（6 個月內(nèi)檢測），避免反復(fù)凍融，標本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。 

龜免疫球蛋白M（IgM）酶聯(lián)免疫試劑盒

注意事項： 

1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫 20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。 

2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。 

3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值。 

4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不 能使用。 

5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。 

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。 

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。 

8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。 

9. 不能使用過期產(chǎn)品。 

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。 

操作步驟：

1．從室溫平衡 60min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。 

2．設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL。 

3．樣本孔中加入待測樣本 50μL；空白孔不加。樣本不足，或者樣本濃度過高，可用樣本希釋液做稀釋。

4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體 100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。 

5．棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5次（也可用洗板機洗板）。 

6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 

7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。 

實驗結(jié)果計算： 

繪制標準曲線：以所測標準品的 OD 值為橫坐標，標準品的濃度值為縱坐標，在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的 OD 值代入方程，計算出樣品的濃度。 

 試劑盒性能： 

1. 檢測范圍：1.32 μg/mL –200 μg/mL。 

2. 靈敏度：檢測濃度小于 0.78 μg/mL。 

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。 

4. 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于 10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

 技術(shù)小提示： 

1. 當混合或重溶蛋白溶液時，盡量避免起沫。 

2. 為了避免交叉感染，配置不同濃度標準品、上樣、加不同試劑都需要更換槍頭。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽。 

3. 每次孵育時，請正確使用封板膠可保證結(jié)果的準確性。 

4. 混合后的顯色底物在上板前應(yīng)為無色，請避光保存；假如微孔板后，將由物色變成不同深度的藍色。 

5. 終止液上板順序應(yīng)同顯色底物上板順序一致；加入終止液后，孔內(nèi)顏色由藍變黃；若孔內(nèi)有綠色，則表明孔內(nèi)液體未混勻；請充分混合。 

說明： 

1. 由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。 

2. 最終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關(guān)，請務(wù)必準備充足的標本備份。 

3. 不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作，網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。 

4. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到最佳的檢測結(jié)果。