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猴磷脂酶C(PLC)酶聯(lián)免疫試劑盒  

產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T（可拆）

產(chǎn)品數(shù)量：咨詢

產(chǎn)品應(yīng)用：ELISA實(shí)驗(yàn)

產(chǎn)品貨期：現(xiàn)貨

有效期：6個(gè)月

保存條件：2-8℃

猴磷脂酶C(PLC)酶聯(lián)免疫試劑盒 

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

標(biāo)本的稀釋原則：首先通過(guò)文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過(guò)程中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。計(jì)算濃度時(shí)，稀釋了“N"倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N"。 

標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。 如配制150 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。 

生物su標(biāo)記抗體的稀釋原則：臨用前以生物su標(biāo)記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100μl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl生物su標(biāo)記抗體加990μl生物su標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。 

辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100μl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。 

準(zhǔn)備工作

1.孔板室溫平衡1小時(shí)

2.做好布板圖譜

3.樣本解凍

4.準(zhǔn)備各型號(hào)的移液槍、槍頭、量筒

5.準(zhǔn)備雙蒸水

6.根據(jù)樣本量配好樣本希釋液

7.根據(jù)樣本量及洗板次數(shù)配好洗液

8.若需要提前設(shè)置好振板器、洗板器

9.準(zhǔn)備足夠量的擦手紙

10.根據(jù)說(shuō)明書提示，溶解標(biāo)準(zhǔn)品

11.配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品

12.配制質(zhì)控品

13.根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果稀釋樣本

14.準(zhǔn)備好封板膜

操作步驟：

1. 加樣：設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔和待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl。注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。每次實(shí)驗(yàn)都應(yīng)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果樣品濃度過(guò)高，可以用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物su標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl生物su標(biāo)記抗體加99μl生物su標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），37℃,60分鐘。溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

3. 每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物su標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

5. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

6. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1. 保證試劑盒的質(zhì)量：選擇正規(guī)廠家生產(chǎn)的試劑盒，確保試劑盒的質(zhì)量和穩(wěn)定性。

2. 嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要嚴(yán)格控制溫度、pH值、離子強(qiáng)度等條件，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3. 避免交叉污染：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要避免交叉污染，確保每個(gè)步驟使用的試劑和材料都是清潔無(wú)污染的。

4. 標(biāo)準(zhǔn)化操作：實(shí)驗(yàn)操作要標(biāo)準(zhǔn)化，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，避免人為誤差對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

5. 定期校準(zhǔn)：定期對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，確保儀器的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。

6. 保存好實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要保存好實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，以便后續(xù)分析和處理。

結(jié)果分析

根據(jù)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，利用標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算待測(cè)樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，通過(guò)計(jì)算得到待測(cè)樣品的濃度。

酶聯(lián)免疫吸附法的優(yōu)點(diǎn)

酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）的優(yōu)點(diǎn)包括：

1.高靈敏度：ELISA可以檢測(cè)出微量的抗原或抗體，其靈敏度通常比其他免疫學(xué)方法更高。

2.高特異性：ELISA僅與特定的抗原或抗體結(jié)合，因此不易受到其他物質(zhì)的干擾，具有較高的特異性。

3.快速：ELISA操作簡(jiǎn)便、快速，可以在短時(shí)間內(nèi)得到結(jié)果。

4.易操作：ELISA實(shí)驗(yàn)操作相對(duì)簡(jiǎn)單，易于標(biāo)準(zhǔn)化和自動(dòng)化，因此適合于大規(guī)模樣品的檢測(cè)。

5.應(yīng)用范圍廣：ELISA可以用于檢測(cè)多種生物分子，如蛋白質(zhì)、多肽、激素等，因此在醫(yī)學(xué)、生物領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。

6.無(wú)放射性核素污染：與放射免疫測(cè)定法相比，ELISA不需要使用放射性核素，因此更為安全、環(huán)保。

總之，ELISA是一種高靈敏度、高特異性、快速、易操作的免疫學(xué)技術(shù)，具有廣泛的應(yīng)用前景。

[售后]

試劑盒售后：本公司出售的試劑盒均保質(zhì)保量，質(zhì)量問(wèn)題均可免費(fèi)退換，另提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)。

細(xì)胞售后：

1、細(xì)胞運(yùn)輸丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)；

2、細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請(qǐng)拍照，未告知的視為產(chǎn)品合格。4-10天內(nèi)出現(xiàn)問(wèn)題，請(qǐng)?zhí)峁┘?xì)胞照片和細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題的照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟，并跟我公司人員及時(shí)溝通判定是否重發(fā)，具體可以參照我或者隨貨說(shuō)明書相關(guān)售后條款。

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