植物過(guò)氧化氫酶(CAT)ELISA試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測(cè)方法。其基本原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合，通過(guò)酶對(duì)底物反應(yīng)的顯色反應(yīng)，對(duì)樣本中的待測(cè)物質(zhì)進(jìn)行定量或定性分析。ELISA方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、適用范圍廣等特點(diǎn)，因此在生物醫(yī)學(xué)研究、臨床診斷和食品安全檢測(cè)等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。

植物過(guò)氧化氫酶(CAT)ELISA試劑盒

準(zhǔn)備工作

1.孔板室溫平衡1小時(shí)

2.做好布板圖譜

3.樣本解凍

4.準(zhǔn)備各型號(hào)的移液槍、槍頭、量筒

5.準(zhǔn)備雙蒸水

6.根據(jù)樣本量配好樣本希釋液

7.根據(jù)樣本量及洗板次數(shù)配好洗液

8.若需要提前設(shè)置好振板器、洗板器

9.準(zhǔn)備足夠量的擦手紙

10.根據(jù)說(shuō)明書提示，溶解標(biāo)準(zhǔn)品

11.配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品

12.配制質(zhì)控品

13.根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果稀釋樣本

14.準(zhǔn)備好封板膜

樣品收集、處理及保存方法

?

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作步驟：

1. 加樣：設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔和待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl。注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。每次實(shí)驗(yàn)都應(yīng)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果樣品濃度過(guò)高，可以用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物su標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl生物su標(biāo)記抗體加99μl生物su標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），37℃,60分鐘。溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

3. 每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物su標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

5. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

6. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的計(jì)算處理方法

1、擬和曲線：

輸入第一行： 濃度值， 如0 10 50 100 400

輸入第二行：該濃度下的調(diào)整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42

選擇這些輸入的數(shù)據(jù)，用插入里的圖表按鈕，進(jìn)入圖表向?qū)?，在“?biāo)準(zhǔn)類型"中選擇“xy散點(diǎn)圖";在“子圖表類型"中選擇“折線散點(diǎn)圖"，按“下一步";選擇“系列產(chǎn)生在行"，按“下一步";數(shù)據(jù)標(biāo)志，可以填寫：如數(shù)據(jù)y軸，OD值;數(shù)據(jù)x軸，濃度;按下一步，點(diǎn)擊完成?？傻们€圖。

單擊曲線，按右鍵，選擇“添加趨勢(shì)線"，在類型中，選擇多項(xiàng)式;在選項(xiàng)中，選擇顯示公式，選擇顯示R平方值。

得到公式和R平方值。

也可以用上面說(shuō)的方法： 雙擊圖表，把它輸入到圖表的數(shù)據(jù)中，就可以擬和曲線。

2、計(jì)算濃度：

第一次實(shí)驗(yàn)：

標(biāo)準(zhǔn)曲線為：

y = -4E-05x2 + 0.026x

R2 = 0.9745

為例，已知OD值，計(jì)算濃度。

由于y = -4E-05x2 + 0.026x，可以得到：

4E-05x2 -0.026x +y=0

ax2 +bx +y=0

注意事項(xiàng)

在進(jìn)行ELISA檢測(cè)時(shí)，需要注意以下幾點(diǎn)：

1. 保證試劑盒的質(zhì)量：選擇質(zhì)量可靠、經(jīng)過(guò)認(rèn)證的試劑盒，避免使用過(guò)期或質(zhì)量不穩(wěn)定的試劑。

2. 標(biāo)準(zhǔn)化操作：按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化操作，避免操作過(guò)程中的人為誤差。

3. 避免交叉污染：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，要特別注意防止樣品和試劑之間的交叉污染，以免影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4. 溫度控制：ELISA檢測(cè)需要在恒溫條件下進(jìn)行，因此要確保實(shí)驗(yàn)過(guò)程中溫度的穩(wěn)定和準(zhǔn)確性。

5. 空白吸光度值：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，要特別注意空白吸光度值的穩(wěn)定性，避免其對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

6. 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理：對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行正確的處理和分析，包括對(duì)異常值的處理、數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換等，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

7. 質(zhì)量控制：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，應(yīng)進(jìn)行必要的質(zhì)量控制，如定期進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評(píng)等，以確保實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

公司簡(jiǎn)介

上海篤瑪生物科技有限公司是一家從事生物學(xué)試劑及試劑盒的高科技生物企業(yè)。總部位于上海，并在全國(guó)設(shè)有經(jīng)銷或代理機(jī)構(gòu)。產(chǎn)品因可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和較為完善的售后服務(wù)確立了“篤瑪生物"良好的品牌形象。公司秉承“以客戶為中心、以產(chǎn)品為保障、以誠(chéng)信為基礎(chǔ)、以創(chuàng)新為宗旨"的發(fā)展理念，擁有專業(yè)的研發(fā)和質(zhì)量檢測(cè)團(tuán)隊(duì)以及*的倉(cāng)儲(chǔ)和物流系統(tǒng)。“篤瑪生物"已經(jīng)得到全國(guó)科研工作者的認(rèn)可。

Shanghai Duma Biotechnology Co., Ltd. is a high-tech biotechnology enterprise engaged in biological reagents and test kits. Headquartered in Shanghai, with distribution or agency agencies nationwide. The product has established a good brand image of "Duma Biotechnology" due to its reliable and stable quality and relatively complete after-sales service. The company adheres to the development philosophy of "customer centeredness, product assurance, integrity as the foundation, and innovation as the purpose", and has a professional R&D and quality inspection team as well as advanced warehousing and logistics systems. "Duma Biotechnology" has been recognized by scientific researchers nationwide and has become a well-known brand highly praised by distributors.

相關(guān)產(chǎn)品