豬自身免疫調(diào)節(jié)因子(AIRE) ELISA 試劑盒 

僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T（可拆）

產(chǎn)品數(shù)量：咨詢

產(chǎn)品應(yīng)用：ELISA實驗

產(chǎn)品貨期：現(xiàn)貨

有效期：6個月

保存條件：2-8℃

豬自身免疫調(diào)節(jié)因子(AIRE) ELISA 試劑盒

實驗原理

1. 抗原抗體反應(yīng)

ELISA試劑盒中的抗原或抗體被固定在固相載體上，當加入待測樣本時，樣本中的抗原或抗體與固相載體上的抗原或抗體發(fā)生反應(yīng)，形成抗原抗體復(fù)合物。

2. 酶標記物的結(jié)合

將酶標記物與特異性抗體或抗原結(jié)合，形成酶標記抗體或抗原。酶標記物在反應(yīng)中起到催化作用，加速反應(yīng)進程，提高檢測靈敏度。

3. 酶促反應(yīng)

在酶標記物與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合后，加入底物溶液，底物在酶的催化下發(fā)生氧化還原反應(yīng)，產(chǎn)生顏色變化。顏色深淺與待測樣本中的抗原或抗體濃度成正比。

4. 吸光度檢測

將反應(yīng)體系中的吸光度進行測量，通過比較標準品溶液與待測樣本溶液的吸光度值，即可計算出待測樣本中的抗原或抗體濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

實驗步驟

1. 抗原包被：將抗原溶液加入到酶標板孔中，包被抗原，使其在孔底形成一層薄膜。

2. 清洗：清洗酶標板，去除未結(jié)合的抗原和其他雜質(zhì)。

3. 阻斷：加入阻斷液，封閉酶標板孔中的非特異性結(jié)合位點，以減少非特異性結(jié)合。

4. 清洗：清洗酶標板，去除未結(jié)合的阻斷液和其他雜質(zhì)。

5. 加樣：加入待測樣本，使其與抗原發(fā)生特異性結(jié)合。

6. 清洗：清洗酶標板，去除未結(jié)合的樣本和其他雜質(zhì)。

7. 加酶標抗體：加入酶標記的抗體，使其與特異性結(jié)合的樣本中的待測物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。

8. 清洗：清洗酶標板，去除未結(jié)合的酶標抗體和其他雜質(zhì)。

9. 顯色反應(yīng)：加入底物溶液，發(fā)生酶催化反應(yīng)，產(chǎn)生有色產(chǎn)物。

10. 終止反應(yīng)：加入終止液，停止酶催化反應(yīng)。

11. 檢測：用酶標儀測定各孔的光密度值，記錄數(shù)據(jù)。

操作注意事項

1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用。

2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3. 濃度為 0 的標準品可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋 5 倍，終結(jié)果乘以5才是樣本終濃度。

4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

6. 若中英文說明書有誤，請以中文說明書為準。

7. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。

8. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

結(jié)果判斷:

1. 每個標準品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計算。以標準品的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪出標準曲線。亦可以O(shè)D值為橫坐標，標準品的濃度為縱坐標，繪出標準曲線。

2. 推薦使用專業(yè)的曲線制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值，由標準曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；亦可將樣品的OD值代入標準曲線的擬合方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

3. 若樣品OD值高于標準曲線上限，應(yīng)適當稀釋后重測，計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。 

洗板方法

1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5次。

2.自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

公司簡介

      上海篤瑪生物科技有限公司是一家國內(nèi)合資集科研和生產(chǎn)為一體的專業(yè)化生物公司。專業(yè)提供各類進口品牌，研發(fā)生產(chǎn)ELISA試劑盒、細胞株、抗體、耗材、培養(yǎng)基等產(chǎn)品，并提供實驗外包，技術(shù)指導，操作指導，代做實驗，代做課題等技術(shù)服務(wù)。公司擁有研發(fā)團隊、研發(fā)平臺及現(xiàn)代化的生產(chǎn)基地，生產(chǎn)各類科研用的產(chǎn)品。 我們由衷的感謝海內(nèi)外科學家、感謝國內(nèi)外廣大科研工作者、學者予以我們鼎力的支持和理解，我們將在未來的工作中，百尺竿頭，發(fā)揮優(yōu)勢，勇于開拓、自主創(chuàng)新、敢為人先、鍥而不舍，在生命科學的道路上，不斷進取，奮發(fā)努力，瞄準國際生命科學的前沿，不斷創(chuàng)新研發(fā)新產(chǎn)品。為科研工作提供更好、更人性化的服務(wù)。

     （Shanghai Duoma Biotechnology Co. , Ltd is a domestic joint venture integrating scientific research and production as one of the specialized biological companies. We specialize in providing various imported brands, R&D and production of ELISA kits, cell strains, antibodies, consumables, culture media and other products, as well as technical services such as experimental outsourcing, technical guidance, operation guidance, experimentation and research. The company has a world-class R&D team, leading technology, cutting-edge R&D platform and modern production base to produce various scientific research products. We are sincerely grateful to scientists at home and abroad, scientific researchers and scholars at home and abroad for their strong support and understanding. In the future work, we will give full play to our advantages, dare to pioneer, independently innovate, dare to be pioneering and persevere, keep forging ahead on the road of life science, strive hard, aim at the frontier of international life science, and continuously innovate and develop new products. Provide better and more humanized services for scientific research.）

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