豬神經(jīng)纖維網(wǎng)蛋白1(NRP1) ELISA 試劑盒

實驗原理

酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測方法。其基本原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合，通過酶對底物反應(yīng)的顯色反應(yīng)，對樣本中的待測物質(zhì)進行定量或定性分析。ELISA方法具有靈敏度高、特異性強、操作簡便、適用范圍廣等特點，因此在生物醫(yī)學(xué)研究、臨床診斷和食品安全檢測等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。

豬神經(jīng)纖維網(wǎng)蛋白1(NRP1) ELISA 試劑盒

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

   標本的稀釋原則：首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標準曲線的范圍內(nèi)，檢測的結(jié)果才是準確的。稀釋的過程中，應(yīng)做好詳細的記錄。計算濃度時，稀釋了“N"倍，標本的濃度應(yīng)再乘以“N"。 

   標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。 如配制150 pg/ml標準品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。 

   生物su標記抗體的稀釋原則：臨用前以生物su標記抗體稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl生物su標記抗體加990μl生物su標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。 

   辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。 

實驗步驟

1. 準備試劑盒：將試劑盒從冰箱中取出，室溫放置30分鐘以上，使試劑盒恢復(fù)至室溫。

2. 加樣：分別向各孔中加入標準品、待測樣本和空白孔，每孔加入50μl。

3. 孵育：用封板膠紙封住反應(yīng)孔，輕輕振蕩混勻，37℃孵育1小時。

4. 洗滌：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液充分洗滌4-5次，每次30秒。

5. 加酶標二抗：每孔加入50μl酶標二抗溶液，輕輕振蕩混勻，37℃孵育30分鐘。

6. 洗滌：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液充分洗滌4-5次，每次30秒。

7. 加底物：每孔加入50μl底物溶液，輕輕振蕩混勻，37℃孵育15-20分鐘。

8. 終止反應(yīng)：每孔加入50μl終止液，輕輕振蕩混勻。

9. 讀數(shù)：用酶標儀在450nm波長處讀取各孔的光密度值。

ELISA試劑盒實驗數(shù)據(jù)的計算處理方法

1、擬和曲線：

輸入第一行： 濃度值， 如0 10 50 100 400

輸入第二行：該濃度下的調(diào)整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42

選擇這些輸入的數(shù)據(jù)，用插入里的圖表按鈕，進入圖表向?qū)?，在“標準類?中選擇“xy散點圖";在“子圖表類型"中選擇“折線散點圖"，按“下一步";選擇“系列產(chǎn)生在行"，按“下一步";數(shù)據(jù)標志，可以填寫：如數(shù)據(jù)y軸，OD值;數(shù)據(jù)x軸，濃度;按下一步，點擊完成。可得曲線圖。

單擊曲線，按右鍵，選擇“添加趨勢線"，在類型中，選擇多項式;在選項中，選擇顯示公式，選擇顯示R平方值。

得到公式和R平方值。

也可以用上面說的方法： 雙擊圖表，把它輸入到圖表的數(shù)據(jù)中，就可以擬和曲線。

2、計算濃度：

第一次實驗：

標準曲線為：

y = -4E-05x2 + 0.026x

R2 = 0.9745

為例，已知OD值，計算濃度。

由于y = -4E-05x2 + 0.026x，可以得到：

4E-05x2 -0.026x +y=0

ax2 +bx +y=0

注意事項：

A 仔細閱讀說明書。

B 檢查試劑盒標簽上的有效期。如果超過有效期，請勿使用。

C 按說明書確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）。

D 標本制備要規(guī)范，每份標本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實驗者，注意低溫保存。

E 準備好所有實驗額外所需物品，（比如移液器，試管，清洗器，酶標儀）。

F 按說明書將所用試劑平衡至室溫，根據(jù)檢測標本數(shù)量確定所需試劑的量。

G 檢查試劑盒內(nèi)每種試劑的貯存條件，保證所有試劑均按照試劑盒內(nèi)說明書推薦的條件存儲。

H 檢查不穩(wěn)定或者變質(zhì)的試劑溶液（比如沉淀或變色）。有些試劑，比如標準品稀釋液或者檢測稀釋液，可能在設(shè)計時就含有沉淀物。所有試劑在滴入酶標板之前，必需充分混勻。而由于沉淀物的特性，在加入酶標板之前，必需不停攪拌。

I 保證充分的孵育時間和溫度。

J 切勿使用不同生產(chǎn)批號的試劑取代現(xiàn)有試劑或混合現(xiàn)有試劑。

K 在混合或溶解蛋白溶液時，避免泡沫產(chǎn)生。

L 在實驗開始之前，安排好實驗流程。

M 在實驗開始之前，清潔工作臺。

N 若有問題，應(yīng)與我公司或代理商的技術(shù)支持聯(lián)系

ELISA試劑盒適用行業(yè)

ELISA試劑盒廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究、臨床醫(yī)學(xué)和工業(yè)等領(lǐng)域。

1.在生命科學(xué)研究領(lǐng)域，ELISA試劑盒可以用于檢測細胞因子、激素、酶、抗體等分子的含量和活性，用于生理學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)等研究領(lǐng)域。

2.在臨床醫(yī)學(xué)診斷中，ELISA試劑盒可以用于檢測血清中的腫瘤標志物、病毒抗體、心肌酶等指標，用于臨床診斷及疾病監(jiān)測。

3.在食品安全檢測中，ELISA試劑盒可以用于檢測食品中的抗生素殘留、農(nóng)藥殘留等有害物質(zhì)，用于食品質(zhì)量檢測和安全評估。

4.在環(huán)境監(jiān)測中，ELISA試劑盒可以用于檢測環(huán)境中的化學(xué)物質(zhì)、微生物等污染物，用于環(huán)境監(jiān)測和污染治理。

5.在動物疾病防控中，ELISA試劑盒可以用于檢測動物血清中的病毒抗體、細菌抗原等指標，用于動物疫病防控和獸藥殘留檢測。

總之，ELISA試劑盒在許多行業(yè)中都有廣泛的應(yīng)用。

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