人碳酸酐酶IX (CA9)酶聯(lián)免疫試劑盒

本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人E-Cad抗體包被于酶標(biāo)板上，實驗時樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的人E-Cad與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入E-Cad抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素?？谷?/span>E-Cad抗體與結(jié)合在包被抗體上的人E-Cad結(jié)合、親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值，人E-Cad濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中人E-Cad的濃度。

人碳酸酐酶IX (CA9)酶聯(lián)免疫試劑盒

樣品收集:
1. 血清：全血樣品于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。
2. 血漿：抗凝劑推薦使用EDTA-Na2，樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，高血脂樣品。
3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果），稱重后剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘，除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。取上清檢測。
5. 其它生物樣品：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測
6. 樣品應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。
7. 樣品收集后若在1周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測)，或-80℃（6個月內(nèi)檢測），避免反復(fù)凍融。
8. 如果您的樣品中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值，請根據(jù)實際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋（建議先做預(yù)實驗，以確定稀釋倍數(shù)）。

人碳酸酐酶IX (CA9)酶聯(lián)免疫試劑盒

試驗所需器材:
1. 酶標(biāo)儀(450nm波長濾光片)
2. 高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
3. 37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水
4. 吸水紙

結(jié)果判斷:
1.以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。亦可以OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2. 推薦使用專業(yè)的曲線制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；亦可將樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
3. 若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測，計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。

注意事項：

1. 試劑盒保存于2-8℃，切勿反復(fù)凍融或長時間保存于室溫。

2. 實驗前確保所有試劑均已恢復(fù)至室溫。

3. 加樣時注意避免產(chǎn)生氣泡。

4. 洗滌時要保證充分洗滌，避免殘留物影響實驗結(jié)果。

5. 底物溶液應(yīng)避光保存，避免長時間暴露于空氣中。

6. 酶標(biāo)儀應(yīng)使用450nm波長進行讀數(shù)，其他波長可能導(dǎo)致誤差。

7. 本試劑盒僅用于科研實驗和診斷參考，不適用于臨床診斷和治療。