人基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)ELISA試劑盒

標(biāo)本要求

1.標(biāo)本來集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗，若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣晶孔。在酵標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中

先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品稀釋團為5倍)。加樣將樣品加于酵標(biāo)板孔廉部，盡量不觸及孔壁，粒?；沃靹颉?/span>

3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘，

4. 配液:將30倍濃罐洗源液用蒸餾水30倍精釋后備用

5. 洗滌:小心拇掉封板膜，棄去液體，甩子，每孔加情洗滌液，靜置30秒后奔去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加呼:每孔加入解標(biāo)試劑50μ，空白孔除外。

7. 溫育:操作同3.

8. 洗滌:操作同5.

9. 顯色:每扎先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，粒粒展落混勻，37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)，

11. 測定:以空白孔調(diào)零:450nm波長限序測量要孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

計算

        以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為職坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線鑒出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍敷;或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值

計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的置線回舊方模式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃質(zhì)，再縮以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃質(zhì)，

人基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)ELISA試劑盒 

注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在壓溫平衡15-30分鐘后方可使用，解標(biāo)包被板開封后如未用充，板條應(yīng)裝入密封筑中保存。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶橋出，稀薦時可在水浴中加溫動漆，洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誘楚，一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣，

4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本0D值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔的OD值)，請先用樣品稅釋液稅釋一定信數(shù)(n倍)后再測定，

計算時請乘以總稀釋倍數(shù)(xnx5)。

5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6.底物請避光俠存。

7。嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以而標(biāo)儀添數(shù)為準(zhǔn),

3.所有樣品，洗滌液和各種廢奔物都應(yīng)接傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得流用。

本試劑盒供研究使用。

檢測范圍:

15ng/L -480ng/L

使用目的:

本試劑盒用于測定人血情，血很及相關(guān)液體樣本中白細胞介素-4(IL-4)含量:

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗伴夾心法測定標(biāo)本中人自細胞介票4(IL-4)水竿。用純化的人白細胞介素-4

入白細胞介素-4(IL-4)，再與HRP標(biāo)記的白細胞介素-4(IL-4)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-解標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色，TMB在HRP解的催化下轉(zhuǎn)

化成藍色，并左釀的作用下轉(zhuǎn)化成黃色，顏色的源淡和樣晶中的白細胞介素-4(IL-4)呈正相關(guān)。用解標(biāo)儀在450mm波長下測定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計

算樣品中人白細胞介素-4(IL-4)濃壓。

保存條件及保存期

1.試劑盒保存::2-8℃.

2.保存期:6個月