人磷酸化腺苷酸(AMPK)ELISA試劑盒  

試劑盒性能

1. 特異性高：由于是抗原抗體的特異性結(jié)合，因此試驗(yàn)的特異性很高，能夠排除其他物質(zhì)的干擾。

2. 靈敏度高：由于酶的放大作用，使得試驗(yàn)的靈敏度大大提高，能夠檢測(cè)出微量的抗原或抗體。

3. 操作簡(jiǎn)便：ELISA試驗(yàn)操作相對(duì)簡(jiǎn)單，容易掌握，適合于大規(guī)模樣本檢測(cè)。

4. 適用范圍廣：可以用于檢測(cè)各種抗原、抗體和激素等生物分子。

用途：

主要用于定量測(cè)定血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其他相關(guān)生物液體中的含量。
產(chǎn)品保存：

2-8℃、有效期6個(gè)月,我司單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP1)酶聯(lián)試劑盒均為批次，您可放心選購(gòu)。
規(guī)格：48T/96T
有效期：6個(gè)月
優(yōu)勢(shì)：靈敏性高，性，吸附均勻，吸附性好，回收利用率高

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

實(shí)驗(yàn)原理

     試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被相關(guān)指標(biāo)的抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的相關(guān)指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

操作步驟

1)涂層:微孔板的孔涂上捕獲抗體或抗原。

2)封閉:孔內(nèi)加入封閉劑(如牛血清白蛋白或羧甲基纖維素)，阻止非特異性蛋

白質(zhì)結(jié)合。

3)樣本添加:加入含有未知濃度的目標(biāo)抗原或抗體的樣本。

4)洗滌:去除未結(jié)合的物質(zhì)。

5)檢測(cè)抗體添加:加入對(duì)特定抗原有特異性的酶標(biāo)記檢測(cè)抗體。

6) 再次洗滌:再次去除未結(jié)合的檢測(cè)抗體。

7)底物添加:加入酶的底物，酶作用于底物產(chǎn)生顏色變化。

8)終止反應(yīng):加入終止溶液停止酶的反應(yīng)(在某些類(lèi)型的ELISA中需要)。

9) 讀數(shù):使用光譜光度計(jì)測(cè)定每個(gè)孔的吸光度(通常是在特定波長(zhǎng)下)，吸光度

與樣本中抗原或抗體的濃度成正比。

人磷酸化腺苷酸(AMPK)ELISA試劑盒  

標(biāo)本的采集及保存

1.血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)一晚后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 (注：標(biāo)本溶血會(huì)影響**檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。)

結(jié)果分析

根據(jù)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，利用標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算待測(cè)樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，通過(guò)計(jì)算得到待測(cè)樣品的濃度。

性能:

1．準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2．靈敏度：檢測(cè)濃度小于10 pg/ml。

3．特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。

4．重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

試劑盒特點(diǎn)
1.專(zhuān)一性強(qiáng)。

抗原與抗體的反應(yīng)是專(zhuān)一反應(yīng)，而酶技術(shù)以反應(yīng)為基礎(chǔ)，所檢測(cè)的對(duì)象是抗原（或抗體），使用的抗體除標(biāo)記了酶以外，與普通抗體的反應(yīng)特性并無(wú)多大差別。
2.靈敏度高。

由于抗體聯(lián)結(jié)上了酶，因此，借助于酶與底物的顯色反應(yīng)，顯示抗原與抗體的結(jié)合，大大提高了檢測(cè)的靈敏性，使檢測(cè)水平接近放射測(cè)定法。
3.樣品易保存。

經(jīng)過(guò)酶反應(yīng)顯示的有色產(chǎn)物大多比較穩(wěn)定，因此有利于樣品的保存。
4.結(jié)果易觀察。

對(duì)檢測(cè)結(jié)果即可用肉眼觀察，又可用顯微鏡觀察，也可以用分光光度計(jì)進(jìn)行比色測(cè)定，還可用顯微鏡觀察。這是因?yàn)槟承┟阜磻?yīng)產(chǎn)物能使電子密度發(fā)生改變，從而引起被檢測(cè)物的顯示。
5.可以定量測(cè)定。

溶液中的抗原物質(zhì)，應(yīng)用酶免吸附技術(shù)進(jìn)行比色測(cè)定，依據(jù)光密度值的變化，可以定量。預(yù)計(jì)用細(xì)胞分光光度計(jì)可對(duì)組織內(nèi)的抗原進(jìn)行酶技術(shù)的定量測(cè)定。
6.可以大規(guī)模測(cè)定樣品。

如有成千上萬(wàn)份樣品需要進(jìn)行檢測(cè)，酶技術(shù)都能在較短時(shí)間內(nèi)完成。
7.儀器和試劑簡(jiǎn)單。

對(duì)沒(méi)技術(shù)來(lái)說(shuō)，不需要熒光顯微鏡，也不需要測(cè)定放射性的特殊儀器，所用儀器及試劑均屬一般性?xún)x器與試劑，普通實(shí)驗(yàn)室及生產(chǎn)應(yīng)用單位均易購(gòu)置.

*特別提醒*

1.取樣和存樣所用的凍存管、離心管、吸頭等需高溫滅菌處理；

2.所有存樣管口需以封口膜封好；

3.所有樣品管壁需要用防水記號(hào)筆清晰標(biāo)明編號(hào)（便于區(qū)分即可）；

免責(zé)聲明

試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或生物體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)， 本公司概不負(fù)責(zé)。

嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，不同批號(hào)不可交換使用，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)