犬單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)酶聯(lián)免疫試劑盒 

檢測(cè)原理

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種常用的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，其基本原理是利用抗原與抗體之間的特異性結(jié)合反應(yīng)，通過(guò)酶促反應(yīng)放大信號(hào)，檢測(cè)微量的蛋白質(zhì)、細(xì)胞因子等生物活性物質(zhì)。ELISA實(shí)驗(yàn)中所需的試劑和耗材需滿足一定的質(zhì)量要求，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì) 胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心 地分離。 

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。 

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘 取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存 于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品 

1. 酶標(biāo)儀（450nm） 

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 

3. 37℃恒溫箱 

操作注意事項(xiàng) 

1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的 濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶溶解 后再使用。

2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保 存。

3. 濃度為 0 的 S0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說(shuō)明 書(shū)操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋 5 倍，最終結(jié)果乘以 5 才是樣本實(shí)際濃度。

4. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

犬單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)酶聯(lián)免疫試劑盒

試劑盒組成 

注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、1.25、2.5、5、10、20 g/L 

試劑的準(zhǔn)備 

20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按 1：20 稀釋?zhuān)?1 份的 20×洗滌 緩沖液加 19 份的蒸餾水。 

洗板方法 

1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡 孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。 

2. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。 

操作步驟 

1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自 封袋密封放回 4℃。 

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μ L； 

3. 樣本孔先加待測(cè)樣本 10μL，再加樣本液 40μL；空白孔不 加。 4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶 （HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋 或恒溫箱溫育 60min。 

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去 洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。 

6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 

7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的 OD 值。 

結(jié)果判斷 

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在 Excel 工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng) OD 值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣 本濃度值。 

試劑盒性能 

1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值，大于等于 0.9900。 

2. 靈敏度：檢測(cè)濃度小于 0.1 g/L。 

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。 

4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。

5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6. 有效期：6 個(gè)月 

免責(zé)聲明 

1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所 產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。 

2. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。