綿羊封閉蛋白14(CLDN14) ELISA 試劑盒 

試驗原理：
本試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將待測物質和標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度呈比例關系。

[需要而未提供的試劑和器材]

1.酶標儀（450nm）

2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

4.蒸餾水或去離子水

備注：

1.  標準品濃度依次為：600、300、150、75、37.5、18.75 ng/mL

2.  經(jīng)過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時，可用將標本進行適當稀釋后再進行實驗。

完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：

（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；

（2）酶標記的抗原或抗體（結合物）；

（3）酶的底物；

（4）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標準品和控制血清（定量測定中）；

（5）結合物及標本的稀釋液；

（6）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；

（7）酶反應終止液，常用的HRP反應終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的*終體積而異，在板式ELISA中一般采用2mol/L。

自備材料
1）蒸餾水。
2）加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3）振蕩器及磁力攪拌器等。

試劑盒安全性
1）避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2）實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3）不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
1）試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2）實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
3）不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4）使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6）洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7）底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8）加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9）按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

綿羊封閉蛋白14(CLDN14) ELISA 試劑盒 

試劑盒樣品收集、處理及保存方法
1）血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2）血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3）細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
5）保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

[注意事項]

1.嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2.洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3.消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

4.底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。

5.避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

6.在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7.平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8.任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

9.不能使用過期產(chǎn)品。

10.如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

[試劑準備]

從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

試劑盒試劑的準備
1）標準品：標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。
2）洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

試劑盒操作步驟
1）使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2）根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。
3）加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4）甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6）甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8）取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
9）在450nm波長處測定各孔的OD值。

試劑盒局限
6號標準品以上的結果為非線性的，根據(jù)此標準曲線無法得到精確的結果。

試劑盒試劑盒性能
1. 靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內、板間變異系數(shù)均小于10%。

試劑盒結果判斷與分析
1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的待測物質標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的待測物質含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

[說明]

1.由于現(xiàn)有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質量技術風險。

2.最終的實驗結果與試劑的有效性、實驗者的相關操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關，請務必準備充足的標本備份。

3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據(jù)試劑盒內說明書進行實驗操作，網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。

4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到最佳的檢測結果。

5.本公司只對試劑盒本身負責，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預留充足的樣本。

6.使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質的引入導致ELISA實驗結果偏差。

ELISA檢測試劑盒承諾

公司長期與各大高校、醫(yī)院及科研單位保持著良好的合作關系，公司的產(chǎn)品質量及服務態(tài)度得到了他們的一致認可。篤瑪生物本著客戶至上的原則為客戶提供優(yōu)質產(chǎn)品，公司承諾產(chǎn)品有任何質量的問題免費包退換（非人為因素造成的）。公司提供免費代測服務，并且承諾收到樣本七個工作日出結果，確保數(shù)據(jù)的準確性。