綿羊Smad同源物3 (Smad3) ELISA 試劑盒     

檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往 預先包被免疫球蛋白M（IgM）抗體的包被微孔中，依次加入標本、 標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯 色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成 最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白M（IgM）呈正相關。 用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細 胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心 地分離。 
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。 
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘 取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存 于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品 
1. 酶標儀（450nm） 
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 
3. 37℃恒溫箱 

操作注意事項 
1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的 濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結晶溶解 后再使用。
2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保 存。
3. 濃度為 0 的 S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明 書操作時樣本已經(jīng)稀釋 5 倍，最終結果乘以 5 才是樣本實際濃度。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

實驗須知
1.嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2.洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3.消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
4.底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。
5.避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。
6.在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7.平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8.任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
9.不能使用過期產(chǎn)品。
10.如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
 
 綿羊Smad同源物3 (Smad3) ELISA 試劑盒 
試劑盒組成 

注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、1.25、2.5、5、10、20 g/L 

試劑的準備 
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌 緩沖液加 19 份的蒸餾水。 

洗板方法 
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡 孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。 
2. 自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。 

[說明]
1.由于現(xiàn)有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術風險。
2.最終的實驗結果與試劑的有效性、實驗者的相關操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關，請務必準備充足的標本備份。
3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作，網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。
4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到最佳的檢測結果。
5.本公司只對試劑盒本身負責，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預留充足的樣本。
6.使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質(zhì)的引入導致ELISA實驗結果偏差。
7.若樣本為細胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。
8.某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。

操作步驟 
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自 封袋密封放回 4℃。 
2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μ L； 
3. 樣本孔先加待測樣本 10μL，再加 40μL；空白孔不 加。 4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶 （HRP）標記的檢測抗體 100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋 或恒溫箱溫育 60min。 
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去 洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。 
6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 
7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。 

結果判斷 
繪制標準曲線：在 Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應 OD 值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣 本濃度值。 

試劑盒性能 
1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù) R 值，大于等于 0.9900。 
2. 靈敏度：檢測濃度小于 0.1 g/L。 
3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。 
4. 重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6 個月 

免責聲明 
1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所 產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。 
2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。