綿羊甘丙肽(GAL) ELISA 試劑盒 

ELISA的樣本實驗準備
在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天就進行檢測的樣本，及時儲存在4℃?zhèn)溆?。對于隔天再檢測的樣本，及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫袟l件的可在-70℃凍存?zhèn)溆?。標本?yīng)避免反復(fù)凍融。

液體類標本:  包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。

1. 血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：
應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

3. 尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

4. 細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。

5. 培養(yǎng)細胞
    檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

6. 組織標本
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。  
 



實驗注意事項

1. 抗原和抗體的儲存

應(yīng)嚴格按照說明書要求存放抗原和抗體，避免反復(fù)凍融和長時間暴露在高溫環(huán)境中。同時要確認試劑盒未過期，以獲得可靠的實驗結(jié)果。

1. 加樣技術(shù)

加樣時應(yīng)確認加入的體積準確且不產(chǎn)生氣泡，避免加在孔壁的邊緣，以免影響與固相表面的接觸。加樣時應(yīng)在每孔的旁邊放置一個加樣對照孔，以監(jiān)測加樣的準確性和重復(fù)性。

1. 溫育

溫育是ELISA實驗中的重要步驟，溫育時間和溫度的控制對于抗原抗體反應(yīng)的進行和結(jié)果的影響至關(guān)重要。必須嚴格按照說明書要求進行溫育，并注意保持恒溫狀態(tài)。

1. 洗滌

洗滌是ELISA實驗中的一步，它可以去除未結(jié)合的物質(zhì)，提高檢測的特異性和靈敏度。洗滌時應(yīng)確認每次洗滌時間充足，并更換洗滌液以確認洗滌效果。同時要避免在洗滌過程中產(chǎn)生氣泡，以免影響洗滌效果。

 
結(jié)果判斷:

1.     每個標準品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計算。以標準品的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪出標準曲線。亦可以O(shè)D值為橫坐標，標準品的濃度為縱坐標，繪出標準曲線。

2.    推薦使用專業(yè)的曲線制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值，由標準曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；亦可將樣品的OD值代入標準曲線的擬合方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
3.  若樣品OD值高于標準曲線上限，應(yīng)適當稀釋后重測，計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。
 
試劑盒 必知說明：

1）只有全部使用本試劑盒配套試劑才能確保檢測效果，

2）不能混用其他制造商的產(chǎn)品，只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到好的檢測結(jié)果。

3）由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。

4）實驗結(jié)果與試劑盒的效果、實驗者的相關(guān)操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關(guān)。

5）請務(wù)必準備充足的標本備份。

6）不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，

如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作。

化學(xué)實驗室守則：

1. 實驗室要保持安靜，嚴禁大聲喧嘩、吵鬧。

2. 在實驗前，要預(yù)先作好實驗前前準備，進入實驗室時，要有秩序，按規(guī)定的座位就座。

3. 實驗前，必須了解清楚實驗內(nèi)容、目的、要求和實驗步驟。

4. 實驗開始時，應(yīng)先查點儀器、產(chǎn)品是否齊全，不得隨意調(diào)換，如發(fā)現(xiàn)問題，及時報告。

5. 實驗必須按步驟進行，并仔細觀察，做好記錄，實驗后后及時寫好實驗報告。

6. 實驗時，要愛護儀器，節(jié)省產(chǎn)品，由于違反操作規(guī)程而損壞丟失的儀器，必須賠償。

7. 實驗結(jié)束，要將儀器整理或清洗，保持桌面，室內(nèi)的整潔后才能離開。

8. 本守則在實驗前都應(yīng)需知。


篤瑪代測服務(wù)：
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容
1、雙抗體夾心法檢測抗原
2、間接法檢測抗體
3、為客戶提供各種ELISA技術(shù)進行樣本檢測。

寄標本時需注明以下情況
1、標本編號；
2、所測項目；
3、是否做復(fù)孔；
4、實驗后標本是否寄回。

問：代測，有什么具體要求？
樣本要處理過的，寄來的樣本附檢驗要求（一定要附檢驗要求）
樣本寄來要記得保存好，一定要放置冷凍冰袋

問:什么樣的檢驗要求？要出示什么嗎？
怎樣算是處理過？還是就只是離心保存？
答：離心保存，檢驗要求，就是標本標號，和特殊要求

問：測好多指標 血清不分開可以么？
答：要分開，分好后，分別標上序列號，便于實驗好區(qū)分。

綿羊甘丙肽(GAL) ELISA 試劑盒 

產(chǎn)品包裝：盒裝
性狀：瓶裝液體
規(guī)格：96T/48T
保存條件：2-8℃
保存期限：6個月
運輸條件：2-8℃低溫運輸，干冰低溫運輸。
 
保存條件及保存期：
1.試劑盒保存：2-8℃。
2．保存期：6個月

試劑盒組成：

1. 酶標板：用于包被抗原和加入酶標抗體；

2. 酶標抗體：與待測血清中的樣本結(jié)合；

3. 抗原：用于包被酶標板，與待測血清中的樣本結(jié)合；

4. 陰性對照血清：用于設(shè)置陰性和陽性對照；

5. 陽性對照血清：用于設(shè)置陰性和陽性對照；

6. 洗滌液：用于清洗酶標板；

7. 底物：用于顯色反應(yīng)；

8. 終止液：用于終止顯色反應(yīng)。

操作步驟
實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1.加樣：分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。
為確認實驗結(jié)果準確性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加標記抗體工作液 100μl（取1μl標記抗體加99μl標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制），37℃,60分鐘。

3.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。

5.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了確認實驗結(jié)果的準確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。



試劑盒會出現(xiàn)的問題及解決辦法：

1. 加入反應(yīng)終止液后，沒有吸光值或吸光值偏低。

a.原因：未加入酶標記物。
解決辦法：請按照操作步驟進行。

b.原因：試劑盒內(nèi)容物未能充分回。
解決辦法：確定試劑盒內(nèi)容物回溫后再進行操作。

c.原因：室溫太低。
解決辦法：若室溫太低(<19℃)，請于操作步驟4，適當延長溫育時間。

d.原因：未使用試劑盒的清洗液清洗。
解決辦法： 請用試劑盒內(nèi)所提供的清洗液清洗。

e.原因：試劑盒已過保存期限。
解決辦法：請更換成仍在保存期限內(nèi)的試劑盒。

2. 標準曲線線性不佳，或是平行性不好。

a.原因：溫育位置避光不好或受到氣流干擾。
解決辦法： 請確認溫育位置既不透光也不透風(fēng)(如抽屜內(nèi))。

b.原因：操作時間拖太久。
解決辦法：請在方法熟練后再進行操作。

c.原因：微孔間相互污染。
解決辦法： 加樣品時，請小心勿濺出微孔外，以免造成其它微孔的污染。

d.原因：標準品或酶標記物所加入的量不一致。
解決辦法：請使用已校正過的移液槍，并確保其與吸頭之間有高度密合性。

e.原因：添加樣品或試劑的操作方法不正確。
解決辦法：加樣品或試劑時，吸頭請勿接觸微孔。

f.原因：洗板過程發(fā)生問題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進行下一步驟)。
解決辦法：請隨時監(jiān)控洗板機洗板過程，洗完后立即進行下一步驟。

3. 吸光值均偏高(或線性不夠陡)。
a.原因：室溫太高(>25℃)。
解決辦法： 若無法降低室內(nèi)溫度，請適當縮短步驟4的溫育時間。

b.原因：底物溶液受到污染。
解決辦法： 若發(fā)現(xiàn)底物溶液已呈現(xiàn)淡藍色，請不要再使用。

c.原因：反應(yīng)時間超過太久。
解決辦法：請控制反應(yīng)時間。

d.原因：酶標記物污染了盒內(nèi)其它試劑。
解決辦法：使用過的吸頭應(yīng)立即丟棄，可避免試劑間相互污染，凡是試劑(特別是酶標記物與底物溶液)接觸過的容器應(yīng)立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡，再以清水沖洗干凈，可確保無殘留)