綿羊GATA結合蛋白3(GATA3) ELISA 試劑盒

ELISA的樣本實驗準備
在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天就進行檢測的樣本，及時儲存在4℃?zhèn)溆?。對于隔天再檢測的樣本，及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?，有條件的可在-70℃凍存?zhèn)溆?。標本應避免反復凍融?/span>

液體類標本:  包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。

1. 血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

2. 血漿：
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

3. 尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。

4. 細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。

5. 培養(yǎng)細胞
    檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

6. 組織標本
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。  
 



實驗注意事項

1. 抗原和抗體的儲存

應嚴格按照說明書要求存放抗原和抗體，避免反復凍融和長時間暴露在高溫環(huán)境中。同時要確認試劑盒未過期，以獲得可靠的實驗結果。

1. 加樣技術

加樣時應確認加入的體積準確且不產生氣泡，避免加在孔壁的邊緣，以免影響與固相表面的接觸。加樣時應在每孔的旁邊放置一個加樣對照孔，以監(jiān)測加樣的準確性和重復性。

1. 溫育

溫育是ELISA實驗中的重要步驟，溫育時間和溫度的控制對于抗原抗體反應的進行和結果的影響至關重要。必須嚴格按照說明書要求進行溫育，并注意保持恒溫狀態(tài)。

1. 洗滌

洗滌是ELISA實驗中的一步，它可以去除未結合的物質，提高檢測的特異性和靈敏度。洗滌時應確認每次洗滌時間充足，并更換洗滌液以確認洗滌效果。同時要避免在洗滌過程中產生氣泡，以免影響洗滌效果。

 
結果判斷:

1.     每個標準品的OD值減去空白孔的OD值后作圖，如設置復孔，則應取其平均值計算。以標準品的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪出標準曲線。亦可以OD值為橫坐標，標準品的濃度為縱坐標，繪出標準曲線。

2.    推薦使用專業(yè)的曲線制作軟件，如curve expert 1.3或1.4，在軟件界面既可根據樣品OD值，由標準曲線查出相應的濃度，乘以稀釋倍數；亦可將樣品的OD值代入標準曲線的擬合方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。
3.  若樣品OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測，計算濃度時應乘以稀釋倍數。
 
試劑盒 必知說明：

1）只有全部使用本試劑盒配套試劑才能確保檢測效果，

2）不能混用其他制造商的產品，只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到好的檢測結果。

3）由于現有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，本產品可能存在一定的質量技術風險。

4）實驗結果與試劑盒的效果、實驗者的相關操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關。

5）請務必準備充足的標本備份。

6）不同批次的同一產品可能會有少許差別，

如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據試劑盒內說明書進行實驗操作。

化學實驗室守則：

1. 實驗室要保持安靜，嚴禁大聲喧嘩、吵鬧。

2. 在實驗前，要預先作好實驗前前準備，進入實驗室時，要有秩序，按規(guī)定的座位就座。

3. 實驗前，必須了解清楚實驗內容、目的、要求和實驗步驟。

4. 實驗開始時，應先查點儀器、產品是否齊全，不得隨意調換，如發(fā)現問題，及時報告。

5. 實驗必須按步驟進行，并仔細觀察，做好記錄，實驗后后及時寫好實驗報告。

6. 實驗時，要愛護儀器，節(jié)省產品，由于違反操作規(guī)程而損壞丟失的儀器，必須賠償。

7. 實驗結束，要將儀器整理或清洗，保持桌面，室內的整潔后才能離開。

8. 本守則在實驗前都應需知。


篤瑪代測服務：
技術服務內容
1、雙抗體夾心法檢測抗原
2、間接法檢測抗體
3、為客戶提供各種ELISA技術進行樣本檢測。

寄標本時需注明以下情況
1、標本編號；
2、所測項目；
3、是否做復孔；
4、實驗后標本是否寄回。

問：代測，有什么具體要求？
樣本要處理過的，寄來的樣本附檢驗要求（一定要附檢驗要求）
樣本寄來要記得保存好，一定要放置冷凍冰袋

問:什么樣的檢驗要求？要出示什么嗎？
怎樣算是處理過？還是就只是離心保存？
答：離心保存，檢驗要求，就是標本標號，和特殊要求

問：測好多指標 血清不分開可以么？
答：要分開，分好后，分別標上序列號，便于實驗好區(qū)分。

綿羊GATA結合蛋白3(GATA3) ELISA 試劑盒

產品包裝：盒裝
性狀：瓶裝液體
規(guī)格：96T/48T
保存條件：2-8℃
保存期限：6個月
運輸條件：2-8℃低溫運輸，干冰低溫運輸。
 
保存條件及保存期：
1.試劑盒保存：2-8℃。
2．保存期：6個月

試劑盒組成：

1. 酶標板：用于包被抗原和加入酶標抗體；

2. 酶標抗體：與待測血清中的樣本結合；

3. 抗原：用于包被酶標板，與待測血清中的樣本結合；

4. 陰性對照血清：用于設置陰性和陽性對照；

5. 陽性對照血清：用于設置陰性和陽性對照；

6. 洗滌液：用于清洗酶標板；

7. 底物：用于顯色反應；

8. 終止液：用于終止顯色反應。

操作步驟
實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1.加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。
為確認實驗結果準確性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加標記抗體工作液 100μl（取1μl標記抗體加99μl標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。

3.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。

5.溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了確認實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。



試劑盒會出現的問題及解決辦法：

1. 加入反應終止液后，沒有吸光值或吸光值偏低。

a.原因：未加入酶標記物。
解決辦法：請按照操作步驟進行。

b.原因：試劑盒內容物未能充分回。
解決辦法：確定試劑盒內容物回溫后再進行操作。

c.原因：室溫太低。
解決辦法：若室溫太低(<19℃)，請于操作步驟4，適當延長溫育時間。

d.原因：未使用試劑盒的清洗液清洗。
解決辦法： 請用試劑盒內所提供的清洗液清洗。

e.原因：試劑盒已過保存期限。
解決辦法：請更換成仍在保存期限內的試劑盒。

2. 標準曲線線性不佳，或是平行性不好。

a.原因：溫育位置避光不好或受到氣流干擾。
解決辦法： 請確認溫育位置既不透光也不透風(如抽屜內)。

b.原因：操作時間拖太久。
解決辦法：請在方法熟練后再進行操作。

c.原因：微孔間相互污染。
解決辦法： 加樣品時，請小心勿濺出微孔外，以免造成其它微孔的污染。

d.原因：標準品或酶標記物所加入的量不一致。
解決辦法：請使用已校正過的移液槍，并確保其與吸頭之間有高度密合性。

e.原因：添加樣品或試劑的操作方法不正確。
解決辦法：加樣品或試劑時，吸頭請勿接觸微孔。

f.原因：洗板過程發(fā)生問題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進行下一步驟)。
解決辦法：請隨時監(jiān)控洗板機洗板過程，洗完后立即進行下一步驟。

3. 吸光值均偏高(或線性不夠陡)。
a.原因：室溫太高(>25℃)。
解決辦法： 若無法降低室內溫度，請適當縮短步驟4的溫育時間。

b.原因：底物溶液受到污染。
解決辦法： 若發(fā)現底物溶液已呈現淡藍色，請不要再使用。

c.原因：反應時間超過太久。
解決辦法：請控制反應時間。

d.原因：酶標記物污染了盒內其它試劑。
解決辦法：使用過的吸頭應立即丟棄，可避免試劑間相互污染，凡是試劑(特別是酶標記物與底物溶液)接觸過的容器應立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡，再以清水沖洗干凈，可確保無殘留)