綿羊M2型同工酶(PKM2) ELISA 試劑盒

試驗(yàn)原理：
本試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知待測(cè)物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將待測(cè)物質(zhì)和標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系。


ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的計(jì)算處理方法
1、擬和曲線：
輸入第一行： 濃度值， 如0 10 50 100 400
輸入第二行：該濃度下的調(diào)整后的od值，如0 0.586 1.397 1.997 3.42
選擇這些輸入的數(shù)據(jù)，用插入里的圖表按鈕，進(jìn)入圖表向?qū)?，在“?biāo)準(zhǔn)類型"中選擇“xy散點(diǎn)圖";在“子圖表類型"中選擇“折線散點(diǎn)圖"，按“下一步";選擇“系列產(chǎn)生在行"，按“下一步";數(shù)據(jù)標(biāo)志，可以填寫：如數(shù)據(jù)y軸，OD值;數(shù)據(jù)x軸，濃度;按下一步，點(diǎn)擊完成?？傻们€圖。
單擊曲線，按右鍵，選擇“添加趨勢(shì)線"，在類型中，選擇多項(xiàng)式;在選項(xiàng)中，選擇顯示公式，選擇顯示R平方值。
得到公式和R平方值。
也可以用上面說(shuō)的方法： 雙擊圖表，把它輸入到圖表的數(shù)據(jù)中，就可以擬和曲線。

2、計(jì)算濃度：
第一次實(shí)驗(yàn)：
標(biāo)準(zhǔn)曲線為：
y = -4E-05x2 + 0.026x
R2 = 0.9745
為例，已知OD值，計(jì)算濃度。
由于y = -4E-05x2 + 0.026x，可以得到：
4E-05x2 -0.026x +y=0
ax2 +bx +y=0


化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒
規(guī)格：96T/48T
檢測(cè)方法：雙抗體夾心法
檢測(cè)范圍:31.25~2000pg/mL

性能:
1．準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。
2．靈敏度：檢測(cè)濃度小于10 pg/ml。
3．特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4．重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

ELISA試劑盒優(yōu)點(diǎn)：
1、高效、靈敏、特異的抗體；
2、重復(fù)性和可靠性高；
3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；
4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型；
5、可檢測(cè)指標(biāo)齊全：細(xì)胞因子檢測(cè)、心肌梗塞檢測(cè)、內(nèi)分泌檢測(cè)、肝纖維化檢測(cè)、自身免疫檢測(cè)、腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)、傳染病檢測(cè)、特種蛋白檢測(cè)、優(yōu)生優(yōu)育檢測(cè)等等；
6、質(zhì)量保證，限度的節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。

影響試劑盒質(zhì)量的因素
    ELISA試劑盒變質(zhì)是ELISA實(shí)驗(yàn)中比較常見的問(wèn)題，下面小結(jié)影響ELISA試劑盒質(zhì)量事項(xiàng)。
1、試劑因素
不同批次的ELISA試劑在制作過(guò)程中很難保證質(zhì)量一致，即使是通過(guò)批批檢的項(xiàng)目其檢測(cè)結(jié)果也存在差異，因此必須選擇和訂購(gòu)長(zhǎng)批號(hào)的試劑，并保證保存條件。 嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號(hào)改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評(píng)估試劑的復(fù)雜過(guò)程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性；對(duì)于效期短、使用率低的試劑，應(yīng)當(dāng)小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。
2、樣本因素
標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素，前者包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體、等，后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。
3、操作因素
ELISA操作步驟復(fù)雜，操作不當(dāng)將引起較大的誤差。加樣、溫育、洗滌、顯色、比色。
4、方法學(xué)的影響
ELISA測(cè)定模式包括以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競(jìng)爭(zhēng)抑制法，其中競(jìng)爭(zhēng)抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時(shí)差所引起的bu公平競(jìng)爭(zhēng)等因素的影響，結(jié)果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難控制。
5、灰區(qū)的設(shè)置
通常情況下，ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽(yáng)性"和“陰性"來(lái)報(bào)告結(jié)果，兩者間有一條分界線被稱為“陽(yáng)性判斷值"(cut-off value，CO值)，這是定性免疫測(cè)定結(jié)果報(bào)告的依據(jù)。
6、標(biāo)本復(fù)查
ELISA手工檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜，影響因素較多，即使室內(nèi)質(zhì)控在控，也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異，因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法，比如對(duì)HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項(xiàng)目的可疑、弱陽(yáng)性標(biāo)本及少見模式的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。
7、常表示結(jié)果的常用方法
1).定性測(cè)定。
2).半定量測(cè)定 結(jié)果一般以滴度表示。
3).定量測(cè)定 即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以量或單位表示。在ELISA定量檢測(cè)中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

綿羊M2型同工酶(PKM2) ELISA 試劑盒

[說(shuō)明]
1.由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對(duì)所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。
2.最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)，請(qǐng)務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。
3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會(huì)有少許差別，如：檢測(cè)限、靈敏度以及顯色時(shí)間等，請(qǐng)依據(jù)試劑盒內(nèi)說(shuō)明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，網(wǎng)站電子版說(shuō)明書僅作參考。
4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測(cè)效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實(shí)驗(yàn)說(shuō)明才會(huì)得到最佳的檢測(cè)結(jié)果。
5.本公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé)，不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本。
6.使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。
7.若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等，所以可能存在檢測(cè)不出的情況。
8.某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè)抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測(cè)出。



*特別提醒*
1.取樣和存樣所用的凍存管、離心管、吸頭等需高溫滅菌處理；
2.所有存樣管口需以封口膜封好；
3.所有樣品管壁需要用防水記號(hào)筆清晰標(biāo)明編號(hào)（便于區(qū)分即可）；
4.所有樣品避免反復(fù)凍融5.如有特別要求，請(qǐng)與服務(wù)該區(qū)域的銷售經(jīng)理講明。

操作步驟：
1. 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2. 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
4. 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。
8. 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9. 在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

使用范圍：此產(chǎn)品供科研實(shí)驗(yàn)使用，不得用于臨床。



注：
1.以上標(biāo)本置4℃保存應(yīng)小于1周，-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存，-20℃不應(yīng)超過(guò)1個(gè)月，-80℃不應(yīng)超過(guò)2個(gè)月。

2.如果樣本種類在實(shí)驗(yàn)手冊(cè)中沒有提到，一般需要做預(yù)實(shí)驗(yàn)以確定試劑盒能被用來(lái)檢測(cè)您的樣品。

3.用于組織或細(xì)胞裂解的化學(xué)裂解液中的某些化學(xué)物質(zhì)可能會(huì)影響ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

4.由于其他來(lái)源的抗原可能和本公司試劑盒中使用的抗體不匹配（例如，抗體的目標(biāo)，是構(gòu)象表位而不是線性表位），其他一些制造商的非重組或重組蛋白可能無(wú)法被本公司試劑盒所識(shí)別。

5.由于包括細(xì)胞活力，細(xì)胞數(shù)量，以及采樣時(shí)間等因素，從細(xì)胞培養(yǎng)上清液提取的樣品，可能無(wú)法被檢測(cè)。

6.建議采用新鮮樣品來(lái)檢測(cè)，不要存放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。否則，蛋白質(zhì)降解和變性可能發(fā)生，*終導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

7.標(biāo)本溶血會(huì)影響*后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。


特別說(shuō)明:
#.一周內(nèi)使用可存于4℃，需長(zhǎng)時(shí)間存放或多次使用建議存于-20℃.

化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒
1.在各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品各100μL，37°C孵育90分鐘
2.倒去孔內(nèi)液體，拍干，加入100μL化抗體工作液，37°C孵育 60分鐘
3.洗滌3次
4.加入 100μL酶結(jié)合物工作液，37°C孵育 30分鐘
5.洗滌5次
6.加入100μL 發(fā)光底物混合液，37°C孵育5分鐘左右
7.立即測(cè)定各孔的化學(xué)發(fā)光值
8.結(jié)果計(jì)算

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1. 抗原和抗體的儲(chǔ)存：應(yīng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書要求存放抗原和抗體，避免反復(fù)凍融和長(zhǎng)時(shí)間暴露在高溫環(huán)境中。同時(shí)要保證試劑盒未過(guò)期，以獲得可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
2. 加樣技術(shù)：加樣時(shí)應(yīng)保證加入的體積準(zhǔn)確且不產(chǎn)生氣泡，避免加在孔壁的邊緣，以免影響與固相表面的接觸。加樣時(shí)應(yīng)在每孔的旁邊放置一個(gè)加樣對(duì)照孔，以監(jiān)測(cè)加樣的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。
3. 溫育：溫育是ELISA實(shí)驗(yàn)中的重要步驟，溫育時(shí)間和溫度的控制對(duì)于抗原抗體反應(yīng)的進(jìn)行和結(jié)果的影響至關(guān)重要。必須嚴(yán)格按照說(shuō)明書要求進(jìn)行溫育，并注意保持恒溫狀態(tài)。
4. 洗滌：洗滌是ELISA實(shí)驗(yàn)中的一步，它可以去除未結(jié)合的物質(zhì)，提高檢測(cè)的特異性和靈敏度。洗滌時(shí)應(yīng)保證每次洗滌時(shí)間充足，并更換洗滌液以保證洗滌效果。同時(shí)要避免在洗滌過(guò)程中產(chǎn)生氣泡，以免影響洗滌效果。

海篤瑪生物科技有限公司專業(yè)研發(fā) ELISA試劑盒長(zhǎng)期為全國(guó)科研機(jī)構(gòu)、高校和科研人員提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，在保證產(chǎn)品質(zhì)量的同時(shí)，我們還配有扎實(shí)的售后技術(shù)咨詢和服務(wù)

服務(wù)承諾：
一、產(chǎn)品品質(zhì)保障（打造高品質(zhì)產(chǎn)品，若產(chǎn)品質(zhì)量存在任何問(wèn)題，公司一律包退包換，質(zhì)量有保障，解除了客戶的后顧之憂）
二、提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)（我司擁有專業(yè)酶免技術(shù)的工作人員為客戶提供來(lái)樣檢測(cè)服務(wù),限度實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性）
三、提供全程技術(shù)指導(dǎo)（專業(yè)的科順技術(shù)人員進(jìn)行指導(dǎo)）
四、全天在線服務(wù)（如果您在使用ELISA試劑盒產(chǎn)品時(shí)有任何的疑問(wèn)，或者對(duì)我們有任何意見建議，您都可以通過(guò)來(lái)電或咨詢。）


免費(fèi)代測(cè) 售后無(wú)憂 可按照要求定制
方便快捷 用途廣泛
特異性強(qiáng) 重復(fù)性好 靈敏度高