綿羊核糖核酸酶H(RNASEH) ELISA 試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T

實(shí)驗(yàn)方法：夾心法

檢測(cè)范圍：78-5000pg/mL

檢測(cè)限：34.2pg/mL

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· 離開(kāi)了細(xì)胞培養(yǎng)皿，還能愉快做實(shí)驗(yàn)嗎

· 培育皿一般用玻璃或塑料制成，是培育微生物或細(xì)胞培育的常用試驗(yàn)耗材，一般玻璃的能夠用于植物資料、微生物培育和動(dòng)物細(xì)胞的貼壁培育也可能用到。塑料的可能是聚乙烯資料的，合適試驗(yàn)室接種、劃線、分離細(xì)菌的操作，能夠用于植物資料的培育。培育皿易碎，在清洗和運(yùn)用時(shí)要當(dāng)心輕拿輕放，運(yùn)用完后要及時(shí)清洗潔凈，存放在安全、固定的方位。

培育皿的清潔：

1、浸泡：新的或用過(guò)的玻璃器皿要先用清水浸泡，軟化和溶解附著物。新玻璃器皿運(yùn)用前得先用自來(lái)水簡(jiǎn)略沖刷，然后用5%鹽酸浸泡過(guò)夜；用過(guò)的玻璃器皿往往附有許多蛋白質(zhì)和油脂，干枯后不易沖刷掉，故用后應(yīng)立即浸入清水中備沖刷。

2、沖刷：將浸泡后的玻璃器皿放到洗刷劑水中，用軟毛刷重復(fù)沖刷。不要留死角，并避免損壞器皿外表的光潔度。將沖刷潔凈的玻璃器皿洗凈、晾干，備浸酸。

3、.浸酸：浸酸是將上述器皿浸泡到清潔液中，又稱酸液，通過(guò)酸液的強(qiáng)氧化作用鏟除器皿外表的可能殘留物質(zhì)。浸酸不該少于六小時(shí)，一般過(guò)夜或更長(zhǎng)。放取器皿要當(dāng)心。

4、沖刷：沖刷和浸酸后的器皿都必須用水充沛沖刷，浸酸后器皿是否沖刷的潔凈，直接影響到細(xì)胞培育的勝敗。手藝洗刷浸酸后的器皿，每件器皿至少要重復(fù)“灌水－倒空"15次以上，最后用重蒸水浸洗2－3次，晾干或烘干后包裝備用。

· 培育皿運(yùn)用留意事宜：

1、運(yùn)用前通過(guò)清潔消毒，培育皿清潔與否對(duì)作業(yè)影響較大，可影響培育基的酸堿度，若有某些化學(xué)藥品的存在，會(huì)按捺細(xì)菌成長(zhǎng)。

2、新購(gòu)的培育皿應(yīng)先用熱水沖刷，再置于分?jǐn)?shù)為1%或2%的鹽酸溶液中浸泡數(shù)小時(shí)，使游離堿性物質(zhì)除掉，再用蒸餾水沖刷2次。

3、若要培育細(xì)菌，再用高壓蒸氣(一般6.8*10的5次方Pa高壓蒸氣)，120℃的溫度下30min滅菌，置室溫中枯燥，或用干熱滅菌，就是將培育皿置于烘箱內(nèi)，溫度控制在120℃左右的情況下保持2h，即可殺死細(xì)菌的胞牙。

4、通過(guò)消毒的培育皿才干接種培育運(yùn)用。

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ELISA試劑盒里都包含了哪些？

一、濃縮

由于凈化進(jìn)程中引入的溶劑，可能會(huì)下降待測(cè)組分的濃度或許不適宜直接分析，需求去除悉數(shù)有機(jī)溶劑。即試劑盒前處理進(jìn)程中把樣本在60℃氮?dú)庀麓蹈桑儆脧?fù)溶液溶解單調(diào)殘留物。

濃縮辦法：氮?dú)獯蹈沙s、壓縮空氣吹干除雜。

二、均質(zhì)

①組織樣本：肉、肝食品類切細(xì)，用絞肉機(jī)反復(fù)絞碎，混合均勻。

②水產(chǎn)樣本：去除樣品的非食用部分，食用部分切細(xì)，用均質(zhì)器均漿；材料表面較臟時(shí),需適當(dāng)用蒸餾水清洗。

③蛋類：鮮蛋去殼，蛋黃和蛋白充分混勻。

④生果、蔬菜類：先用水洗去泥沙，ELISA試劑盒然后除去表面的水分，取食用部分。

· 三、振蕩提取

· 將提取溶劑參與到裝有樣品的具塞容器中，振蕩，使提取溶劑與容器內(nèi)的樣品充分接觸以深化到樣本組織內(nèi)部，提取待測(cè)組分。

①振蕩辦法：振蕩器上進(jìn)行上下、往復(fù)式振蕩、手搖式上下振蕩。

②在組織樣本中參與有機(jī)溶劑之間提取時(shí)，應(yīng)邊加邊振蕩，避免組織凝集成團(tuán)，不利于提取。

四、請(qǐng)留心：

①在吹干樣本之前，用甲醇清洗針頭，避免雜質(zhì)煩擾。

②在吹樣本時(shí)，針頭應(yīng)在液面上空，避免與樣本接觸，避免發(fā)作交叉污染。

③樣本吹干后應(yīng)當(dāng)即取下，ELISA試劑盒避免吹的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，影響畢竟檢測(cè)成果。

④不同的藥物，吹干后樣本的保質(zhì)期不同，建議待樣本回到室溫后當(dāng)即復(fù)溶。

如何保證ELISA試劑盒的質(zhì)量

一、辦法學(xué)的影響

ELISA測(cè)定模式包含以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競(jìng)賽抑制法，其中競(jìng)賽抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時(shí)差所引起的平競(jìng)賽等要素的影響，成果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難控制。

二、試劑要素

不同批次的ELISA試劑在制造進(jìn)程中很難確保質(zhì)量一致，即使是經(jīng)過(guò)批批檢的項(xiàng)目其檢測(cè)成果也存在差異，因而必須選擇和訂貨長(zhǎng)批號(hào)的試劑，并確保保存條件。嚴(yán)厲執(zhí)行這一規(guī)范可以防止因試劑批號(hào)改動(dòng)而從頭樹(shù)立質(zhì)控系統(tǒng)及從頭評(píng)估試劑的雜亂進(jìn)程，并且可以確保成果的穩(wěn)定性；對(duì)于效期短、使用率低的試劑，應(yīng)當(dāng)小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，防止重復(fù)凍融造成試劑的失效。

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· 三、樣本要素

· 標(biāo)本攪擾要素包含內(nèi)源性攪擾要素和外源性攪擾要素，ELISA試劑盒前者包含類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體等，后者包含標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本儲(chǔ)存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、標(biāo)本凝結(jié)不全、冷凍標(biāo)本的重復(fù)凍融等。

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· 四、操作要素

· ELISA操作步驟雜亂，操作不當(dāng)將引起較大的誤差。加樣、溫育、洗滌、顯色、比色。

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· 五、灰區(qū)的設(shè)置

· 通常情況下，ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽(yáng)性"和“陰性"來(lái)陳述成果，兩者間有一條分界線被稱為

· “陽(yáng)性判斷值"(cut-off value，CO值)，這是定性免疫測(cè)定成果陳述的依據(jù)。

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· 六、標(biāo)本復(fù)查

· ELISA手工檢測(cè)進(jìn)程雜亂，影響要素較多，即使室內(nèi)質(zhì)控在控，也可能因孔間差異而造成成果的差異，因而加大復(fù)查力度是確保成果準(zhǔn)確性的牢靠辦法，比如對(duì)HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項(xiàng)目的可疑、弱陽(yáng)性標(biāo)本及罕見(jiàn)模式的檢測(cè)成果進(jìn)行復(fù)查。

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· 七、常表明成果的常用辦法

· 1.定性測(cè)定

· 2.半定量測(cè)定 成果一般以滴度表明。

· 3.定量測(cè)定 即用已知量的規(guī)范品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測(cè)定，制作規(guī)范曲線，成果以jue對(duì)量或單位表明。在ELISA試劑盒定量檢測(cè)中每一塊反應(yīng)板都必須制作相應(yīng)的規(guī)范曲線。

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· 不按說(shuō)明書(shū)操作會(huì)造成的后果

· 每一個(gè)試劑盒里都會(huì)有對(duì)應(yīng)的說(shuō)明書(shū)，注意事項(xiàng)里大多都會(huì)提到“實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行"。為什么要嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作？為了更完整的回答這個(gè)問(wèn)題，需要先回顧一下ELISA各種方法的原理。

· 根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀及檢測(cè)的具體條件，可設(shè)計(jì)出不同類型的檢測(cè)方法。大致分為以下幾類：

· 1.雙抗體夾心法測(cè)抗原

· 2.雙抗原夾心法測(cè)抗體

· 3.競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原

· 4.間接法測(cè)抗體

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穩(wěn)定性
經(jīng)測(cè)定，試劑盒在有效期內(nèi)按推薦溫度保存，其活性降低率小于5%。為減小外部因素對(duì)試劑盒破壞前后檢測(cè)值的影響，實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境條件需盡量保持一致，尤其是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實(shí)驗(yàn)員來(lái)進(jìn)行操作可減少人為誤差。

注意：
試劑盒內(nèi)酶標(biāo)條可拆卸，按實(shí)驗(yàn)需求可分多次使用；使用后的剩余試劑盒建議在實(shí)驗(yàn)后 1個(gè)月內(nèi)使用完畢。產(chǎn)品過(guò)期時(shí)間以盒子上的標(biāo)簽為準(zhǔn)，保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的。

綿羊核糖核酸酶H(RNASEH) ELISA 試劑盒

一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
保存條件：
除標(biāo)準(zhǔn)品外，4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。

注意事項(xiàng)：
   由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
   洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶溶解后再配制工作液。
     為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
   TMB對(duì)人體有刺激性，操作時(shí)請(qǐng)小心，并注意適當(dāng)防護(hù)以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
   加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
   不宜混用不同批號(hào)的試劑盒組份，每批次試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試。
   充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
   本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
   洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
   檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
   加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。

本產(chǎn)品限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說(shuō)明：
1. 樣品準(zhǔn)備
a. 樣品的準(zhǔn)備請(qǐng)按下列流程進(jìn)行操作：
(a) 細(xì)胞上清樣品離心取上清即可(如100-500g，5分鐘)。
(b) 對(duì)于血清樣品，將全血在室溫放置30分鐘至2小時(shí)，不要?jiǎng)×覔u晃以免溶血，待全血自然凝固并析出血清后，4℃約1000-2000g離心10分鐘，取黃色上清即得血清，注意不要吸取白色或淡黃色沉淀。制備好的血清需置于冰上待用。
(c) 對(duì)于血漿樣品，采集的全血使用肝素或者EDTA進(jìn)行抗凝處理，混勻后置冰上，4℃約1000-2000g離心10分鐘，取黃色或淡黃色上清即得血漿，注意不要吸取白色沉淀。制備好的血漿需置于冰上待用。
(d) 若待測(cè)樣品不能及時(shí)檢測(cè)，樣品制備后請(qǐng)分裝，凍存于-20℃或-80℃，并注意避免反復(fù)凍融。
b. 血清樣品不應(yīng)添加任何防腐劑或抗凝劑。
c. 樣品應(yīng)清澈透明，檢測(cè)前樣品中如有懸浮物應(yīng)通過(guò)離心去除。
d. 請(qǐng)勿使用溶血、高血脂或污染的樣品檢測(cè)，否則結(jié)果將不準(zhǔn)確。
注：血清或血漿樣品可能需要用樣品分析緩沖液適當(dāng)稀釋后再檢測(cè)。

2. 檢測(cè)前準(zhǔn)備工作
a. 試劑盒從冰箱中取出后應(yīng)置室溫(25-28℃)平衡20分鐘；每次檢測(cè)后剩余試劑請(qǐng)及時(shí)置于4℃保存。

b. 配制適當(dāng)量的洗滌液：將洗滌液(20X)用雙蒸水或去離子水稀釋至1X，例如10ml洗滌液(20X)加190ml水混勻后即為1X的洗滌液。
c. 按標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上標(biāo)注的體積加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液至1瓶標(biāo)準(zhǔn)品中，室溫孵育15分鐘(為確保標(biāo)準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)確性，切勿縮短孵育時(shí)間)。隨后輕輕混勻并用移液槍吹打幾次使標(biāo)準(zhǔn)品溶解，使標(biāo)準(zhǔn)品終濃度達(dá)到4000pg/ml。

通常每個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品需要檢測(cè)2個(gè)孔，每個(gè)孔的標(biāo)準(zhǔn)品用量為100μl，共需200μl，同時(shí)稀釋時(shí)還需要使用250μl，因此如果1瓶標(biāo)準(zhǔn)品配制后的體積不足0.45ml，請(qǐng)使用更多瓶數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品，并在合并混勻后使用。

d. 取5個(gè)潔凈的1.5毫升離心管，每管預(yù)先加入250μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，并參考圖2進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋，最終得到4000、2000、1000、500、250、125pg/ml共六個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度，最后將稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品依次加入預(yù)包被板孔中，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液直接加入作為0pg/ml濃度，共七個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度。

ELISA實(shí)驗(yàn)因靈敏度高，特異性強(qiáng)在生物科研上得到了廣泛的認(rèn)可，但對(duì)初學(xué)者而言，如不注意實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中的各個(gè)環(huán)節(jié)，可能會(huì)對(duì)最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生比較大的影響，比如實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)白板，顯色弱靈敏度低，花板無(wú)梯度背景高等現(xiàn)象。下面對(duì)以上實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象進(jìn)行一一解析。

1.白板現(xiàn)象
在完成所有實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行底物TMB溶液顯色后，酶標(biāo)板中所有孔的顏色均為無(wú)色，即無(wú)信號(hào)呈現(xiàn)。
出現(xiàn)該現(xiàn)象的可能原因：
a.試劑已過(guò)保質(zhì)期，不同批次稀釋液交叉使用。
b.錯(cuò)加漏加檢測(cè)A，檢測(cè)B或者底物溶液TMB。
c.洗板或者加樣過(guò)程中，酶標(biāo)記物被污染失活，稀釋液中含有酶抑制劑如疊氮吶等。
d.配置稀釋液的蒸餾水可能被污染。
e.洗滌液是濃縮型的，沒(méi)有按比例進(jìn)行稀釋。
f.酶標(biāo)記物的活性和效價(jià)比較低。

g.溶液的PH值不正確，一般稀釋液的PH值應(yīng)保持在7.2-7.4。
2.顯色弱靈敏度低
在完成所有實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行底物TMB溶液顯色后，酶標(biāo)板中孔的顯色比較淺，即只有微弱的信號(hào)呈現(xiàn)。
出現(xiàn)該現(xiàn)象的可能原因：
a.產(chǎn)品過(guò)有效期，試劑沒(méi)有按規(guī)定進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋４妗?br/>b.試劑，標(biāo)準(zhǔn)品或者樣品在使用前沒(méi)有平衡到室溫。
c.少加了試劑的量或者加入試劑的稀釋比例不當(dāng)。
d.洗板或者加樣過(guò)程中，酶標(biāo)物受污染失活。
e.孵育時(shí)間和孵育溫度未達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。
f.洗滌液稀釋倍數(shù)不符合要求，洗板次數(shù)過(guò)多，洗板沖擊力過(guò)大，洗板浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。
g.底物溶液TMB顯色時(shí)間太短。

3.花板無(wú)梯度背景高
在完成所有實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行底物TMB溶液顯色后，酶標(biāo)板中的孔有顏色但沒(méi)有梯度，背景也可能較高.

出現(xiàn)該現(xiàn)象的可能原因：
a.底物溶液TMB未置于陰涼避光處保存，實(shí)驗(yàn)前溶液已經(jīng)變藍(lán)。
b.孵育溫度過(guò)高或者孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，發(fā)生了較強(qiáng)的非特異性吸附。
c.沒(méi)有按說(shuō)明書(shū)要求洗板，特別是洗板時(shí)洗滌液的量少加了。
d.加樣時(shí)沒(méi)有換槍頭造成交叉污染。
e.花板現(xiàn)象：低濃度或者低活性的包被抗體或者檢測(cè)抗體，封閉不足導(dǎo)致的本底不穩(wěn)定，洗板不充分，包被板子的問(wèn)題。

總結(jié)如果不按說(shuō)明書(shū)操作可能會(huì)出現(xiàn)的不滿意結(jié)果。

A. 先說(shuō)最嚴(yán)重的操作錯(cuò)誤，看錯(cuò)或壓根不看試劑盒配套說(shuō)明書(shū)，不按操作步驟加樣。比如把競(jìng)爭(zhēng)法的試劑盒當(dāng)作雙抗體夾心法來(lái)做，導(dǎo)致的結(jié)果就是整板顯示很強(qiáng)的藍(lán)色，無(wú)任何梯度。

B. 混用別的試劑盒里的試劑。不同廠家或者相同廠家的不同試劑盒，所含的試劑成分很可能是不一樣的，混用導(dǎo)致的結(jié)果是，浪費(fèi)珍貴的樣本，樣品的回收率達(dá)不到預(yù)期值，如果混用不同試劑盒的酶復(fù)合物，會(huì)導(dǎo)致顯色過(guò)弱或過(guò)強(qiáng)，因?yàn)槊糠N試劑盒所用酶復(fù)合物效價(jià)可能不一樣。

C. 不看文獻(xiàn)或者不做預(yù)實(shí)驗(yàn)。比如某個(gè)試劑盒按照其靈敏度范圍和文獻(xiàn)報(bào)道推算樣本應(yīng)該1:10稀釋，結(jié)果稀釋成1:1000，導(dǎo)致的結(jié)果是顯色過(guò)弱，結(jié)果不可用。

D. 不校準(zhǔn)移液器及培養(yǎng)箱的溫度濕度。導(dǎo)致工作試劑濃度不準(zhǔn)確，孵育溫度不合適，實(shí)驗(yàn)帶來(lái)誤差。

E. 洗滌不充分，每孔洗液加樣過(guò)少，或者殘留。導(dǎo)致的結(jié)果是顯色過(guò)快，同時(shí)背景較高。

F. 手洗板時(shí)所用槍頭沒(méi)有懸空加入洗液，導(dǎo)致洗液污染，整個(gè)實(shí)驗(yàn)失敗。

G. 剩余酶標(biāo)板條未及時(shí)放入干燥袋，導(dǎo)致酶標(biāo)板受潮，下一次再做時(shí)，顯色過(guò)弱或污染，CV值過(guò)高。

綜上所述：在ELISA實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意以下問(wèn)題：
1.在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)該按相關(guān)要求將實(shí)驗(yàn)試劑平衡至室溫。
2.包被抗體和檢測(cè)抗體應(yīng)該是有高活性的且都針對(duì)同一抗原。
3.試劑保存：蛋白抗體類試劑保存于-20攝氏度，顯色液洗滌液保存于2-8攝氏度。
4.各試劑在使用前應(yīng)充分混勻，以保證試劑的均一性和準(zhǔn)確性。
5.嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度和反應(yīng)試劑。
6.洗板次數(shù)，洗板液的量，洗板液浸泡時(shí)間的長(zhǎng)短，洗板的力度都是應(yīng)該注意的問(wèn)題。
7.相關(guān)濃縮液應(yīng)按要求稀釋到相應(yīng)比例方可使用，PH值要保持在7.2-7.4之間。
8.在終止反應(yīng)時(shí)盡量避免微孔中存有氣泡。
9.終止反應(yīng)完成后應(yīng)該在2min內(nèi)完成酶標(biāo)儀讀數(shù)。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！