豚鼠β血小板球蛋白ELISA 試劑盒

供體外研究使用，不用于臨床診斷!

超敏ECL化學發(fā)光示意圖

使用方法：

1.印跡膜制備：執(zhí)行常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP標記的抗體或者HRP標記的核酸探針孵育、洗膜；ECL工作液含有HRP催化的發(fā)光底物，檢測系統(tǒng)必須基于HRP酶標記的抗體或者核酸探針。充分的洗滌對于降低背景非常重要，所有步驟均在室溫下完成。

2.ECL工作液的配置：在使用前取等量A液和B液，混合均勻并盡快使用；將膜片置混合液中，于室溫下孵育約1分鐘，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2 ml以覆蓋全膜片，注意不要在膜片表面形成氣泡。

3.蛋白或核酸信號顯現(xiàn)：

1).用平頭鑷鉗住膜片，垂直置于吸水紙上以吸去過量試劑，僅留下少量液體覆蓋表面，不可讓膜干燥；

2).將膜片置于保鮮膜上，吸附蛋白面朝上，小心趕盡氣泡；

3).用電子裝置感光，或在暗室中用X光片曝光；

4).根據(jù)信號強弱適當調(diào)整曝光時間，也可選擇不同時間多次曝光，以取得更佳效果。

應用

用于阻斷能受體對人內(nèi)皮細胞體外血管生成的影響研究

   普萘洛爾、酚妥拉明抑制人微血管內(nèi)皮細胞體外血管生成目的研究離體情況下,p-AR阻斷劑普萘洛爾、a-AR阻斷劑酚妥拉明對人微血管內(nèi)皮細胞增殖、遷移、成管及VEGF、VEGFR-2、Ang1、Ang2、Tie-2表達的影響。

方法

1.細胞免疫熒光鑒定內(nèi)皮細胞：細胞采用免疫熒光染色Ⅷ因子進行鑒定。將人皮膚微血管內(nèi)皮細胞和人腦微血管內(nèi)皮細胞接種于24孔板爬片。待細胞融合至80%-90%時,4%冰固定20分鐘,0.2%Triton X-100通透10分鐘,羊血清封閉30分鐘。兔多克隆Ⅷ因子（vWF）一抗4℃濕盒內(nèi)過夜。TRITC標記的羊抗兔二抗室溫孵育2小時（避光）。Hochest（1μg/ml）染核15分鐘（避光）后10%甘油封片。正置熒光顯微鏡下觀察、拍片（×200倍）。

2. Western blot檢測人微血管內(nèi)皮細胞a-AR的表達：未經(jīng)藥物處理的人皮膚微血管內(nèi)皮細胞和人腦微血管內(nèi)皮細胞經(jīng)裂解獲得總蛋白。BCA定量,沸水滅活。取總蛋白約40μg進行SDS-PAGE凝膠電泳后,轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。5%BSA封閉1小時,蛋白樣品分別在4℃冰箱孵育兔多克隆抗α1-AR、α2-AR一抗過夜。次日在37℃孵箱中孵育相應的二抗1h。采用超敏ECL化學發(fā)光試劑盒顯色,于暗室內(nèi)壓片,顯影定影。

3.細胞增殖實驗：將人皮膚微血管內(nèi)皮細胞種植于96孔板,將不同濃度梯度的普萘洛爾（0,25,50,75,100μM）、酚妥拉明（0,10,30,50,70μg/ml）分別處理細胞48h。然后每孔加入10μlCCK-8,孵箱中繼續(xù)培養(yǎng)2h。之后于酶標儀測450nm下吸光度值。

[試劑盒性能]

1. 檢測范圍：18.75 ng/mL – 600 ng/mL。

2. 靈敏度：低檢測濃度小于1.0 ng/mL。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。

4. 重復性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

[說明]

1.由于現(xiàn)有條件及科學技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風險。

2.終的實驗結(jié)果與試劑的性、實驗者的相關(guān)操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關(guān)，請務必準備充足的標本備份。

3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作，網(wǎng)站電子版說明書作參考。

4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到佳的檢測結(jié)果。

5.本公司只對試劑盒本身負責，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預留充足的樣本。

6.使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質(zhì)的引入導致ELISA實驗結(jié)果偏差。

7.若樣本為細胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。

8.某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。

[試劑盒性能]

1. 檢測范圍：18.75 ng/mL – 600 ng/mL。

2. 靈敏度：低檢測濃度小于1.0 ng/mL。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。

4. 重復性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

[說明]

1.由于現(xiàn)有條件及科學技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風險。

2.終的實驗結(jié)果與試劑的性、實驗者的相關(guān)操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關(guān)，請務必準備充足的標本備份。

3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時間等，請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作，網(wǎng)站電子版說明書作參考。

4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到佳的檢測結(jié)果。

5.本公司只對試劑盒本身負責，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預留充足的樣本。

6.使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質(zhì)的引入導致ELISA實驗結(jié)果偏差。

7.若樣本為細胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。

8.某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。

豚鼠β血小板球蛋白ELISA 試劑盒

ELISA檢測試劑盒承諾

公司長期與各大科研單位保持著良好的合作關(guān)系，公司的產(chǎn)品質(zhì)量及服務態(tài)度得到了他們的一致認可。篤瑪生物本著客戶至上的原則為客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，公司承諾產(chǎn)品有任何質(zhì)量的問題免費包退換（非人為因素造成的）。公司提供免費代測服務，并且承諾收到樣本七個工作日出結(jié)果，確保數(shù)據(jù)的準確性。

試驗原理：
本試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質(zhì)濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將待測物質(zhì)和標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系。

完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：

（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；

（2）酶標記的抗原或抗體（結(jié)合物）；

（3）酶的底物；

（4）陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標準品和控制血清（定量測定中）；

（5）結(jié)合物及標本的稀釋液；

（6）洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20緩沖鹽水；

（7）酶反應終止液，常用的HRP反應終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的*終體積而異，在板式ELISA中一般采用2mol/L。

自備材料
1）蒸餾水。
2）加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3）振蕩器及磁力攪拌器等。

試劑盒安全性
1）避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2）實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3）不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
1）試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2）實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3）不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4）使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6）洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7）底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8）加入試劑的順序應一致，以所有反應板孔溫育的時間一樣。
9）按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

背景

  超敏ECL化學發(fā)光試劑盒是化學發(fā)光系統(tǒng)，也稱為超敏型ECL發(fā)光液，用于檢測固定在膜上的蛋白或核酸，靈敏度高，背景低，檢測靈敏度可達高飛克(femtogram)級，適用于檢測痕量蛋白或核酸。發(fā)光信號持久，所采用的配方足以維持6小時以上的發(fā)光，便于反復曝光操作。與普通ECL化學發(fā)光底物相比，可明顯減少一抗和二抗的使用量。

原理

   超敏型ECL化學發(fā)光底物試劑盒用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶（HRP）的抗體、抗原或者核酸。蛋白質(zhì)或核酸在電泳后轉(zhuǎn)移到印跡膜上，以HRP標記的抗體或探針結(jié)合膜上的目的蛋白或核酸，洗膜后置于用本產(chǎn)品配制的ECL工作液中，室溫孵育數(shù)分鐘，HRP使工作液中的魯米諾（Luminol）氧化并發(fā)光，試劑中添加的增強劑可以使得這種發(fā)光大大增強。此光經(jīng)X光膠片或者電子裝置感光記錄下來，可清晰顯示蛋白質(zhì)或核酸條帶。