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免疫組化中抗體的加入
這看似很簡單的問題,如果處理不好也可導致不同的結(jié)果,如果應用自動免疫組織化學染色儀,將程序輸入即可,
如為手工操作,就必須注意以下的問題:
1.當 PBS 沖洗完畢后,在加入抗體,如一抗,二抗或三抗。必須將存留于切片上的多余的PBS 摔干,但不能讓切片干涸,切片干涸,往往可產(chǎn)生非特異性染色,切片上PBS 存留過多,將會稀釋加入的抗體,影響加入抗體的濃度,同時也將影響最后的結(jié)果,如假陰性等。
2.加入的抗體以一滴為佳。當擦干組織塊周邊多余的 PBS 后,切片保持著一定的濕潤度,此時加入另外的抗體為最佳時候,滴入抗體以一滴 50ml 為好,加入后,輕微地搖勻地覆蓋于切片上,使最后的結(jié)果穩(wěn)定均衡,不至于有的地方有反應,有的地方無反應。
3.切片沒擦好將會影響加入抗體的質(zhì)量,切片沒沖洗干凈,沒擦試好,當加入抗體后,它可縮于切片的一邊,此時你為了使加入的抗體能夠地覆蓋整個切片,便會使勁地加入抗體,此時的結(jié)果是,抗體依然滑向一邊,或者露出,這不光沒達到目的,還浪費抗體,正確的做法就是地用 PBS 沖洗,摔干切片擦干切片周邊的 PBS,再滴入一滴抗體輕輕搖勻即可。
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