免疫組化的染色過程，除了前面的處理和加入的抗體外，都在 PBS 的沖沖洗洗中度過，PBS沖洗的正確與否，也是導(dǎo)致最后結(jié)果的關(guān)鍵。

1. 單獨沖洗，防止交叉反應(yīng)造成污染。臨床上每天檢測的病例很多，所用的抗體種類及項目也多，如果一抗孵育完后，將它們在一個缸內(nèi)洗，這樣就會造成交叉污染，影響最后的結(jié)果。正確的做法是單獨地進(jìn)行沖洗，沖洗的 PBS 為一次性，保證切片沒有相互交叉污染的機(jī)會。

2. 溫柔沖洗，防止切片的脫落。沖洗切片，取出切片，將 PBS 從上輕輕地沖洗，讓 PBS 自上而下流下來，不要拿起切片將PBS 對準(zhǔn)切片沖洗，這樣由于沖出的 PBS 有一定的沖擊力，很容易使切片周邊引起松動，導(dǎo)致切片的脫落。

3. 沖洗的時間要足夠，才能洗去結(jié)合的物質(zhì)。沖洗切片有人提出用微振蕩器振染，振下未結(jié)合的各種物，使之不產(chǎn)生背景，此種做法一是浪費時間，二是很容易導(dǎo)致切片的脫落。切片的沖洗據(jù)實踐認(rèn)為，用一小燒杯柔和地于切片上沖洗，就能沖洗去未結(jié)合的物質(zhì)，無需附加其它條件，沖洗好于切片上再注入PBS，持續(xù) 2 分鐘左右就足夠了。

4. PBS 的 PH 和離子強(qiáng)度的使用和要求。指出：中性及弱鹼性條件（PH7－8）有利于免疫復(fù)合物的形成，而酸性條件則有利于分解；低離子強(qiáng)度有利于免疫復(fù)合物的形成，而高離子強(qiáng)度則有利于分解。［］免疫組化P56 我們目前常用的 PBS 的 PH 在 7.4-7.6 濃度是 0.01M，根據(jù)本室十幾年來的使用情況，認(rèn)為該溶液價格便宜配制方面，使用效果好。

5. 常用試劑的配制和使用。在免疫組織化學(xué)的染色過程中，用得最多的試劑就是緩沖液，因為切片在整個染色中，抗體的加，換，切片的沖洗，DAB 的都離不開緩沖液。可見緩沖液在整個染色中都起至關(guān)鍵的作用，緩沖液的過酸或偏堿，都將影響染色的結(jié)果。