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簡要描述:我司提供免費代測,委托單位的試驗材料和試劑等均須采用特快專遞形式郵寄,有低溫要求的、固定要求的,按低溫保存、固定防碎方法運輸,以確保實驗樣本的安全。如數(shù)量巨大,我司可以讓專業(yè)人員前往提取。詳情請與我司銷售人員聯(lián)系。人整合素關(guān)聯(lián)蛋白(IAP) ELISA 試劑盒
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被相關(guān)指標的抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的相關(guān)指標呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
1. 準備試劑
根據(jù)需要準備適量的ELISA試劑盒,包括抗體、酶標二抗、標準品等。
2. 制備標準品溶液
將標準品按照說明書上的要求進行稀釋,一般采用倍比稀釋法,制備成不同濃度的標準品溶液。
3. 加樣
將待測樣本和標準品溶液分別加入對應的微孔板中,按照說明書上的加樣量加入相應的體積。
4. 孵育
將微孔板密封后置于37℃孵育一定時間,一般為1-2小時。
5. 洗滌
洗滌是ELISA實驗中非常重要的一步,需要按照說明書上的要求進行正確的洗滌操作。洗滌的目的是去除未結(jié)合的物質(zhì),減少非特異性干擾。
6. 加酶標二抗
洗滌完成后,加入酶標二抗,按照說明書上的加樣量加入相應的體積。然后再次將微孔板密封后置于37℃孵育一定時間。
7. 洗滌
同步驟5,進行正確的洗滌操作。
8. 加底物溶液
洗滌完成后,加入底物溶液,按照說明書上的加樣量加入相應的體積。然后將其置于室溫下避光孵育一定時間。
9. 終止反應
加入終止液,使反應停止。一般采用硫酸作為終止液。
10. 檢測讀數(shù)
在酶標儀上讀取各孔的光密度值,記錄數(shù)據(jù)。根據(jù)標準品溶液的濃度和光密度值繪制標準曲線,再根據(jù)待測樣本的光密度值在標準曲線上求出濃度。
試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
說明書 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片(48) | 2片(96) | |
密封袋 | 1個 | 1個 | |
酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
標準品:36U/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶標試劑 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。
人整合素關(guān)聯(lián)蛋白(IAP) ELISA 試劑盒
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