猴IVD組磷脂酶A2(PLA2G4D)酶聯(lián)免疫試劑盒  

樣本實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

        在收集樣本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的樣本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆谩?duì)于隔天再檢測(cè)的樣本，及時(shí)分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫袟l件的，最好-70℃凍存?zhèn)溆谩?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。

液體類(lèi)標(biāo)本:  包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

1. 血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

3. 尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：

檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。

5. 培養(yǎng)細(xì)胞

    檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

6. 組織標(biāo)本

    切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

猴IVD組磷脂酶A2(PLA2G4D)酶聯(lián)免疫試劑盒

實(shí)驗(yàn)步驟

1. 抗原包被：將抗原溶液加入到酶標(biāo)板孔中，包被抗原，使其在孔底形成一層薄膜。

2. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的抗原和其他雜質(zhì)。

3. 阻斷：加入阻斷液，封閉酶標(biāo)板孔中的非特異性結(jié)合位點(diǎn)，以減少非特異性結(jié)合。

4. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的阻斷液和其他雜質(zhì)。

5. 加樣：加入待測(cè)樣本，使其與抗原發(fā)生特異性結(jié)合。

6. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的樣本和其他雜質(zhì)。

7. 加酶標(biāo)抗體：加入酶標(biāo)記的抗體，使其與特異性結(jié)合的樣本中的待測(cè)物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。

8. 清洗：清洗酶標(biāo)板，去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體和其他雜質(zhì)。

9. 顯色反應(yīng)：加入底物溶液，發(fā)生酶催化反應(yīng)，產(chǎn)生有色產(chǎn)物。

10. 終止反應(yīng)：加入終止液，停止酶催化反應(yīng)。

11. 檢測(cè)：用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔的光密度值，記錄數(shù)據(jù)。

試劑盒組成

結(jié)果計(jì)算方法如下

1.計(jì)算陰性對(duì)照A值的平均數(shù)(NCX )和陽(yáng)性對(duì)照A值的平均數(shù)(PCX)。

2.兩個(gè)平均數(shù)的差(P-N)必須大于一個(gè)特定的數(shù)值，例如0.400，試驗(yàn)才有效。

3.3個(gè)陰性對(duì)照A值均應(yīng)≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而已另兩個(gè)陰性對(duì)照重新計(jì)算NCX；如有兩個(gè)陰性對(duì)照A值超出以上范圍，則該次實(shí)驗(yàn)無(wú)效。

4.陽(yáng)性判定值按下式計(jì)算：陽(yáng)性判定值=NCX+0.05。

5.標(biāo)本A值>陽(yáng)性判定值的為陽(yáng)性，小于陽(yáng)性判定值的為陰性。

需要注意的是，試劑盒的常數(shù)只適合于該特定條件下，而不是對(duì)各種試劑均可通用。

注意事項(xiàng)

1. 實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本試劑盒的使用說(shuō)明，確保所有材料、器具和試劑準(zhǔn)備齊全。

2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，請(qǐng)務(wù)必遵循實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行操作，并注意控制實(shí)驗(yàn)條件的一致性。

3. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)勿觸摸酶標(biāo)板上的酶標(biāo)抗體區(qū)域，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后請(qǐng)及時(shí)清洗并整理實(shí)驗(yàn)器具，避免交叉污染。

5. 本試劑盒僅供體外診斷使用，使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，如有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系廠家或?qū)I(yè)技術(shù)人員。

試劑盒性能

1. 檢測(cè)范圍：1.95 nmol/L –100 nmol/L。

2. 靈敏度：檢測(cè)濃度小于0.78 nmol/L。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

合作單位

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、北京大學(xué)、貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院、中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)

天津疾控中心、江南大學(xué)、山東大學(xué)、青島大學(xué)、香港大學(xué)

云南省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院

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